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RNA甲基化测序
MeRIP-Seq (methylated RNA immunoprecipitation sequencing)结合RNA-蛋白免疫共沉淀和高通量测序技术,可实现全转录组水平上RNA甲基化分析。由于甲基化修饰约占所有RNA修饰的60% 以上,而N6-甲基腺嘌呤(N6-methyladenosine,m6A),作为最常见的一种转录后修饰,介导了超过80%的RNA甲基化。基于MeRIP-Seq分析RNA甲基化模式,加速了癌症发生和转移、胚胎发育、脂类代谢、环状RNA翻译和DNA损伤修复等生物学功能和作用机制的研究。锐博生物利用单克隆抗体抓取存在m6A修饰的RNA片段,结合高通量测序,实现转录组学范围内的m6A peak检测与motif分析。
客户采用锐博生物的MeRIP/m6A-seq整体技术服务
现已顺利在国际知名期刊 Nature Communications 和 Molecular Cancer 发表了高分文章
[1] Wang H, Hu X, Huang M, et al. Mettl3-mediated mRNA m 6 A methylation promotes dendritic cell activation[J]. Nature communications, 2019, 10(1): 1898. (影响因子:11.87)
[2] Li T, Hu P S, Zuo Z, et al. METTL3 facilitates tumor progression via an m 6 A-IGF2BP2-dependent mechanism in colorectal carcinoma[J]. Molecular cancer, 2019, 18(1): 112. (影响因子:10.679)
服务优势
● 平台完整: MeRIP实验—建库测序分析—MeRIP qPCR验证,真正一站式服务
● 高成功率:成功开展超过1000例样本,支持低至ng级别RNA建库
● 灵活选择:建库方式和文库片段大小可选
● 重复性好:丰富的项目经验确保实验重复性,已进行多样本间的比较分析
服务流程



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文献和实验其序列和结构影响转录的延伸、暂停和停顿,以及发挥染色体修饰结合和增强子的作用。nascent RNA- seq方法旨在区分新近转录的RNA和其它RNAs,这些方法可以分为4类:溴尿苷(BrU)免疫共沉淀深度测序分析( BRIC-seq ),4sU-seq,瞬时转录组测序( TT-seq),代谢标记法(SLAM-seq)(图2)。
之前剪切底物。但 ACA 序列的第一个 A 发生 m6A 甲基化之后将无法被 MazF 所识别。MazF RNA 酶作用示意图根据这一原理,作者将纯化后的 mRNA 进行 MazF 酶处理,然后再对打断的 RNA 进行逆转建库测序。对于无修饰的位点,ACA 处被完全剪切,测序 reads 正好分布于该位点上下游而且比对至该处的上下游 reads 数是相同的。而甲基化位点的 reads 会包含上下游的序列。作者开发了 MAZTER-MINE 软件包专门进行分析。MAZTER-Seq 实验
结论:m6A 参与了 EMT 的过程,并且非常重要!!2.EMT 过程中 m6A 调控的核心基因的鉴定;既然确认 m6A 在 EMT 中存在调控功能,因此下一步就是对被调控的基因进行鉴定了。作者使用 meRIP-seq 实验,对 EMT 前后细胞中 RNA 的 m6A 修饰状况进行了研究。发现 EMT 前后 m6A 的 motif、RNA 功能区的分布和基因组上的分布都没有显著区别,但鉴定出了 128 个 m6A 修饰水平存在显著差异(1.5Fold)的基因,这些基因的功能进行分析发现与癌细胞中的粘附
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