如何获得高质量、高可信度的荧光定量PCR结果--高质量cDNA标准
荧光定量PCR(Real-time PCR)是目前基因表达定量分析的重要检测手段,已经为越来越多的研究者所采用。“好的开始是成功的一半”,Perrez-Novo等(Perrez-Novo et al. 2005)曾报道获得高质量RNA对后续PCR定量结果的准确性是非常重要的,而高质量RNA是获得高质量cDNA的必要条件,所以本文着重介绍一下如何获得高质量cDNA。&nb ...
来源:互联网 8672 阅读
经验分享:简并引物设计实际操作步骤
一、利用ncbi搜索不同物种中同一目的基因的蛋白或cDNA编码的氨基酸序列因为密码子的关系,不同的核酸序列可能表达的氨基酸序列是相同的,所以氨基酸序列才是真正保守的。首先利用NCBI的Entrez检索系统,查找到一条相关序列即可。随后利用这一序列使用BLASTp(通过蛋白查蛋白),在整个Nr数据库中中查找与之相似的氨基酸序列。二、对所找到的序列进行多序列比对将搜索到的同一基因的不同氨基酸序列进行多序列比对,可 ...
来源:互联网 8630 阅读
启动子克隆方法研究进展
随着基因工程的发展,常常需要构建一种能高水平表达异源蛋白质的表达载体。启动子对外源基因的表达水平影响很大,是基因工程表达载体的重要元件。因此研究启动子的克隆方法,对研究基因表达调控和构建表达载体至关重要。迄今为止,国外尚未见到有关启动子克隆方法的综述性报道,国内仅孙晓红等曾就启动子的结构、分类、克隆方法和食用菌中已经分离到的启动子作过综述。而近年来又有许多改进的克隆启动子的方法获得了多方面的成功 ...
来源:互联网 8629 阅读
[分享]PCR扩增产物的分析方法
微孔板夹心杂交法颜色互补分析法PCR-ELISA法PCR-OLA法PCR-打点杂交法微孔板夹心杂交法: 该法是通过一固定于微孔板的捕获探针与PCR产物的某一区域特 异杂交使产物的间接地固定于微孔板上,然后,再用一生物素 等非放射性标记物标记的检测探针与产物的另一特异性较一次 杂交,漂洗后显色即可判断结果。该法需要两个杂交过程来检测 一个产物,因此,其特异性较一次杂交的检测法高。该法已用于HBV 的检测,其敏感度可达5个HBVDNA分 ...
来源:丁香园论坛 8587 阅读