靶向连接蛋白43通过调控YAP信号在脑出血损伤后发挥抗炎作用

背景 在中枢神经系统中，连接蛋白43（Cx43）主要在星形胶质细胞中表达，并调节星形胶质细胞网络的稳态。与Cx43过表达类似，反应性星形胶质细胞上Cx43半通道（Cx43Hcs）的异常过度开放会加剧中枢神经系统病理中的炎症反应和细胞死亡。然而，Cx43Hc过度开放在大脑出血（ICH）损伤中的作用尚不清楚。 方法 原代细胞中的血红素刺激和C57BL/6J（B6）小鼠中的胶原酶IV注射分别用作体外和体内ICH模型。ICH损伤后，使用Cx43模拟肽Gap19进行治疗。使用溴化乙啶（EtBr）摄取实验测量Cx43Hcs的开放。使用Western blotting和免疫荧光测量蛋白质表达。使用qRT-PCR和ELISA测定细胞因子水平。应用免疫共沉淀（Co-IP）和Duolink原位邻位连接实验（PLA）测量蛋白质之间的关联。 结果 在本研究中，观察到ICH损伤后小鼠中Cx43表达上调和Cx43Hc过度开放。延迟使用Gap19治疗显著减轻了ICH损伤后的血肿体积和神经功能缺损。此外，Gap19降低了血肿周围组织中的炎症细胞因子水平，并在体外和体内ICH损伤后减少了反应性星形胶质增生。有趣的是，在培养中，血红素刺激后星形胶质细胞中Cx43的转录活性和表达显著增加。然而，Gap19治疗通过泛素-蛋白酶体途径下调星形胶质细胞Cx43的表达，而不影响Cx43转录。此外，我们的数据表明，Gap19增加了Yes相关蛋白（YAP）的核转位。这随后上调了SOCS1和SOCS3的表达，并抑制了血红素刺激的星形胶质细胞中的TLR4-NFκB和JAK2-STAT3通路。最后，YAP抑制剂维替泊芬（VP）在体外逆转了Gap19的抗炎作用，并在ICH损伤后几乎完全阻断了其在体内的保护作用。 结论 本研究为涉及星形胶质细胞Cx43和Cx43Hcs的ICH损伤治疗策略提供了新的见解。通过Gap19抑制异常的星形胶质细胞Cx43表达和Cx43Hc开放，在ICH损伤后具有抗炎和神经保护作用。