细胞常用实验

细胞转染是指将外源分子如 DNA、RNA 等导入真核细胞的技术。可以分为瞬时转染和稳定转染，两种方法的优缺点比较如下：瞬时转染生产迅速、周期短、成本低、表达效率高，不需要筛选基因，但不能长期表达基因；对一些难转染的细胞来说，表达效率低，稳定转染能长期表达，得到稳转株后成本降低，适用于难转染的细胞，成本较高、周期长、操作步骤多。

免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation，Co-IP）是一种利用抗原与抗体之间的专一性为基础，广泛应用于研究蛋白质与蛋白质相互作用的经典研究方法。CO-IP与GST-pulldown方法比较方法优点缺点CO-IP反应蛋白在天然状态下的结合情况，真实可信不能确定蛋白之间的结合是直接还是间接的结合GST-pulldown 能确定蛋白之间是否有直接相互作用 GST分子量较大，可能会影响

一、试剂配制 1. PY 试剂的配制：PY 1.0 g 以 100 ml 蒸馏水溶解，配成母液，置 4℃ 冰箱保存。PY 工作液：取 1 ml PY 母液，加入 1 mol/L pH 4.7 的醋酸缓冲液 100 ml，稀释为 0.01% 的浓度。 2. 1.0 mol/L pH 4.7 醋酸缓冲液的配制：冰醋酸 11.55 ml 加蒸馏水至 1000 ml；无水醋酸钠 16.4 g 加蒸馏水

取 20 mg 异硫氰酸荧光素，加 20 ml 无水乙醇，使 FITC 充分溶解，即为染色液的原液，保存于 4℃ 冰箱待用。具体荧光染色步骤如下：1. FITC 贮存液的稀释：用 pH 7.4 的 PBS 液稀释成 50 ug/ml 浓度的工作液，备用。2. 被染色细胞首先用 70% 酒精破膜，作用 10 min，使 FITC 染料能进入到细胞中。3. 用离心法以 PBS 液洗去破膜剂，离心收集细

免疫荧光通过抗体与示踪物质结合，利用抗原-抗体结合反应，进而对抗原所在的细胞或组织进行定性或定量。免疫荧光与免疫细胞化学比较方法优点缺点免疫荧光步骤较简单，可同时标记多种蛋白，图片伪彩色观赏性强荧光容易淬灭，样品保存时间不长免疫细胞化学样品适合长期保存步骤繁琐，一次只能标记一种蛋白

免疫细胞化学与免疫细胞荧光两者实现的实验目的相似，但各有优缺点方法比较方法优点缺点免疫细胞化学样品可长期保存一次只能标记一种蛋白免疫细胞荧光步骤较简单，可同时标记不同蛋白，图片观赏性强样品保存时间较短

活性氧检测 (Reactive Oxygen Species Assay) 是一种利用荧光探针 DCFH-DA 进行活性氧检测的试剂盒。DCFH-DA 本身没有荧光，可以自由穿过细胞膜，进入细胞内后，可以被细胞内的酯酶水解生成 DCFH。而 DCFH 不能通透细胞膜，从而使探针很容易被装载到细胞内。细胞内的活性氧可以氧化无荧光的 DCFH 生成有荧光的 DCF。检测 DCF 的荧光就可以知道细胞内

Cell Counting Kit-8（简称CCK-8）试剂可用于简便而准确的细胞增殖和毒性分析。CCK-8 & MTT 方法比较方法优点缺点CCK-8 法灵敏度高、不使用有机溶剂、检测迅速、重复性好价格较 MTT 贵、CCK-8 试剂的颜色为淡红色、与含酚红的培养基颜色接近，容易漏加或多加MTT 法价格便宜操作步骤较多，需要使用有机试剂，灵敏度不如 CCK-8，多数需要配制，检测时间长，

细胞毒性是指由细胞或化学物质引起的单纯细胞杀伤事件，不依赖于凋亡或坏死的细胞死亡机理。 常用细胞毒性检测方法有 CCK-8 法、MTT 法、LDH 法。1、与 MTT 法相比：1）CCK-8 使用更为方便，无需洗涤细胞；2）CCK-8 法能快速检测；CCK-8 法的检测线性范围广，灵敏度更高；4）CCK-8 法的重复性更好，MTT 实验生成的 formazan 不是水溶性的，需要使用 DMSO 等

创伤愈合实验是一种简单、廉价的方法，也是最早发展起来的研究定向细胞在体外迁移的方法之一。该方法模拟了细胞在体内愈合过程中的迁移过程。基本步骤包括在细胞单层中创建一个“伤口”，在细胞迁移过程中在开始和定期捕获图像以关闭伤口，以及比较图像以确定细胞迁移速率。