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        划痕法

        相关实验:细胞划痕实验

        最新修订时间:

        原理

        创伤愈合实验是一种简单、廉价的方法,也是最早发展起来的研究定向细胞在体外迁移的方法之一。该方法模拟了细胞在体内愈合过程中的迁移过程。基本步骤包括在细胞单层中创建一个“伤口”,在细胞迁移过程中在开始和定期捕获图像以关闭伤口,以及比较图像以确定细胞迁移速率。

        材料与仪器

        实验材料
        试剂、试剂盒
        仪器、耗材

        步骤

        一.准备:
        所有能灭菌的器械都要灭菌,直尺和marker笔在操作前紫外照射30min(超净台内)

        二.流程:
        1.先用marker笔在6孔板背后,用直尺比着,均匀得划横线,大约每隔0.5~1cm一道,横穿过孔。每孔至少穿过5条线。
        2.在空中加入约5X105个细胞,具体数量因细胞不同而不同,掌握为过夜能铺满。
        3.第二天用枪头比着直尺,尽量垂至于背后的横线划痕,枪头要垂直,不能倾斜。
        4.用PBS洗细胞3次,去处划下的细胞,加入无血清培养基。
        5.放入37度5%CO2培养箱,培养。按0,6,12,24小时取样,拍照。

        下面是照片,细胞NIH3T3
        0h
        划痕法

        6h
        划痕法

        12h
        划痕法

        24h
        划痕法

        注意事项

        1.划痕法测量适用的细胞范围较小,一般只适用于上皮细胞,纤维样细胞。


        2.虽然无血清培养可以忽略细胞增殖的影响,但是由于细胞内信号传导系统整体性的下调节,细胞迁移的速度也会慢很多。


        来源:丁香实验

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