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反转录 RT-PCR 实验进阶
反转录 RT-PCR 实验进阶
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问
mirna206RT-PCR 引物和内参有什么资料可参考学习？
我是金博士
请你明确问题，是miRNA RT-PCR还是miRNA real time PCR?
1 回答
995 围观
问
如何估计 RT-PCR 扩增产物的大小？
tao0129
你设计的正、反向引物的起止序列编号之差就是扩增产物的长度，如果一段使用oligo（T）就加上它的长度就可以了。
1 回答
3263 围观
问
RT-PCR 特异性，实验组和阳性及阴性对照组最后都出现了目的条带是为什么？
hl16010921
1.人或哺乳动物的保守基因可能是操作者带来的污染。（这点很容易被忽视，尤其是老手）2.多样品时加样失误，用排管或板时有时出现。3.试剂或水的污染尤其是公共试剂。4.电泳点样或上样时混入。5.误将引物二聚体当做目的带了（目的带低于100bp时或目的带没出，无marker时可能性大）6.都换新的重做。同时PCR时一定带手套，做实验前拖地，清洁台面，把头发，胡子包一下，不要有人员走来走去。
3 回答
1626 围观
问
用于反转录PCR的RNA浓度范围是？
xiadongliang
反转录问题应该不大，1ug的RNA template实在是太多了。去哪儿弄那么多做反转录啊。可能是你设计的引物不太好，扩增存在非特异性条带。
1 回答
1436 围观
问
提取RNA后反转录跑PCR电泳阳性对照没有条带？
水行船
阳性对照是什么，整个实验流程描述一下，信息太少了题主：阳性对照是FLAG ，DSP但是一条带都没有，是不是我提RNA，或者是反转录哪里出问题了，求解。
2 回答
671 围观
问
如何选择反转录PCR的内参？
cloud-clone
你的内参选择稳定是兔抗鸡GAPDH或B-ACTIN的抗体了。内参抗体实质就是一个一抗。
2 回答
762 围观
问
RT－PCR在RNA干扰中是否还有作用？
zhuqueleee
我觉得你的方法有点问题的。你不应该仅仅通过观察RNAi前后实验组、空白组的cDNA含量变化来监测RNAi效果，而是应当把空白组和实验组再各设一个看家基因对照，通过看家基因和目的基因的量的对比，从而观察你的RNAi效果。个人意见，希望对你的实验有所帮助。
3 回答
524 围观
问
关于 RT－PCR 的 RNA 提取
qjm7717
用飞捷的试剂盒试试，15分钟搞定，当然组织可能稍微费时一点。
9 回答
479 围观
问
如何排除RT－PCR
life
结合个人实验，我觉得有两种方法可以佐证（1）如果你的正反向引物或只有一侧的引物可以设计在EXON的边缘，你可以在设计时，让一个引物的一部分跨过一个内含子，这样从DNA上是拉不到产物的，只有从CDNA上可以得到。（2）验证是否存在DNA污染，你也可以用其他已知基因的引物从DNA和CDNA拉出片段的差异来看你的模板中是否有DNA你可以结合验证，另外DNase消化时要充分
4 回答
504 围观
问
怎么 RT－PCR 老不出结果
zhangcs
我的目的基因长度是580bp，第一次三管p出来的也是580bp，污染或杂带也不会这么巧就出现在这个位置吧，另外我用的是同一台pcr仪，同试验室的师兄也用这台pcr仪，没问题呀，至于条件，我做过很多次梯度了，循环次数也改了很多次，由于我的目的基因比较长，4500bp，而且产物片断也比较长，我怀疑是不是目的基因断成小片断了，我因此也重提了很多次RNA,但还是不行呀，我下一步该怎么办，帮帮我吧，谢谢了！
1 回答
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