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        RT-PCR在RNA干扰中是否还有作用?

        相关实验:实时定量 PCR 实验

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        丁香实验

        请问各位:RT-PCR在RNAi效果的检测中是否还有作用。假设RNAi的效率达到50%,即有一半的RNA被降解掉,那么RT后,实验组、空白组的cDNA含量就相差了一倍,仅仅一倍的差异通过PCR能够反映出来吗?请高手指教。
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        3 个回答

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        zhuqueleee

        有帮助
        我觉得你的方法有点问题的。你不应该仅仅通过观察RNAi前后实验组、空白组的cDNA含量变化来监测RNAi效果,而是应当把空白组和实验组再各设一个看家基因对照,通过看家基因和目的基因的量的对比,从而观察你的RNAi效果。 个人意见,希望对你的实验有所帮助。
        user-title

        zhuqueleee

        有帮助
        像我们用b-actin做内参,一起PCR的时候目的基因跑30个循环,b-actin可以只跑20-23个循环即取出。当然各个基因不一样,具体问题具体分析。
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        smile51730

        有帮助
        RNAi效率可以通过RNA和蛋白水平检测,而RNA水平的检测普遍的是通过RT-PCR方法。但RT-PCR是半定量的,所以可能不会很好的反应出你的干扰效率。你可以用RT-PCR试试,假如有条件,建议你用real time PCR。
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