RT－PCR在RNA干扰中是否还有作用？
丁香实验
请问各位：RT－PCR在RNAi效果的检测中是否还有作用。假设RNAi的效率达到50％，即有一半的RNA被降解掉，那么RT后，实验组、空白组的cDNA含量就相差了一倍，仅仅一倍的差异通过PCR能够反映出来吗？请高手指教。
3 个回答
zhuqueleee
有帮助
我觉得你的方法有点问题的。你不应该仅仅通过观察RNAi前后实验组、空白组的cDNA含量变化来监测RNAi效果，而是应当把空白组和实验组再各设一个看家基因对照，通过看家基因和目的基因的量的对比，从而观察你的RNAi效果。
个人意见，希望对你的实验有所帮助。
zhuqueleee
有帮助
像我们用b-actin做内参，一起PCR的时候目的基因跑30个循环，b-actin可以只跑20-23个循环即取出。当然各个基因不一样，具体问题具体分析。
smile51730
有帮助
RNAi效率可以通过RNA和蛋白水平检测，而RNA水平的检测普遍的是通过RT-PCR方法。但RT-PCR是半定量的，所以可能不会很好的反应出你的干扰效率。你可以用RT-PCR试试，假如有条件，建议你用real time PCR。
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