单细胞×空间组学实操与应用（肿瘤篇）

物种类型人，小鼠。样品质检要求及运输Xenium 正式实验前需要进行 RNA 质检和普通 H＆E 染色质检，质检标准如下：RNA 质检标准：FFPE 样本：DV200>30%；RNA 浓度≥20ng/μL。OCT 包埋样本：RIN＞4；RNA 浓度≥20ng/μL。H＆E 染色质检标准：组织形态、切片完整；样本区域及切片不存在脱片等风险；细胞核相对致密。运输条件：FFPE 样本：4℃ 低温运

物种来源适用于常见动物物种，主要适用于人类病理样本，另外包括但不限于鼠、猴、猪等样本。样品要求及运输条件样本要求：蜡块制作可参考各医院病理科制作蜡块的流程，要求脱水充分、浸蜡充分，切片可连续成片、无裂痕和空腔（组织本身自带除外），样本切片过程中不会与外部包埋的蜡分离；组织尺寸不应超过 0.9 cm×0.9 cm×2 cm（芯片大小为 1 cm×1 cm 时），组织切片/芯片面积不应超过 80%；R

一、Visium HD 3’样本收样标准物种来源全物种样品要求及运输条件样本置于 80℃ 保存，干冰运输。注：为保证组织结构的完整性，防止储存或运输过程中的组织形态改变，请客户按以下步骤处理样本后送样。送样请至少提前 24 小时告知。新鲜冷冻组织1）在金属烧杯中加入三分之二的异戊烷 (使得样本足以完全浸入液体中)，然后放入液氮容器中，液氮与异戊烷的液面相平以便使其充分接触预冷。孵育 15 min。

物种来源人、小鼠（其他物种请于实验前沟通）送样方式送样请至少提前 24 小时告知。需要流式分选的至少提前 48 小时告知。本地客户组织样本：表 1. 组织样本表样本类型新鲜组织组织样本大小至少 250 mm3处理方式用 1640 培养基、PBS 缓冲液或生理盐水清洗 2-3 遍，客户也可以根据自己组织的情况，选择适宜培养基清洗。对于肿瘤等不易沾染血液的组织也可以不清洗。保存方式离体后 30 min

1）用移液器吸取 4 mL HISTOPAQUE®-1077 到 15 mL 离心管内，室温平衡至少 15 min。2）外周血恢复至室温后，吸取 4 mL 外周血，小心缓慢地加入到装有淋巴细胞分离液的 15 mL 离心管内，25℃，400 x g 离心 30 min。3）小心取出离心管，此时离心管内液体分为三层，上层为血浆，中间层为分层液，底层为红细胞，在上、中层液体界面处可见到乳白色混浊的单个核