• 我要登录|
  • 免费注册
    |
  • 我的丁香通
    • 企业机构:
    • 成为企业机构
    • 个人用户:
    • 个人中心
  • 移动端
    移动端
丁香通 logo丁香实验_LOGO
搜实验

    大家都在搜

      大家都在搜

        0 人通过求购买到了急需的产品
        免费发布求购
        发布求购
        点赞
        收藏
        wx-share
        分享

        10x Xenium 原位检测收样标准

        相关实验:微量样本核酸

        最新修订时间:

        材料与仪器

        石蜡包埋样本,FFPE 自行切片样本;OCT 包埋样本,OCT 包埋组织切片 (不推荐)。

        步骤

        物种类型

        人,小鼠。

        样品质检要求及运输

        Xenium 正式实验前需要进行 RNA 质检和普通 H&E 染色质检,质检标准如下:

        RNA 质检标准:

        FFPE 样本:DV200>30%;RNA 浓度≥20ng/μL

        OCT 包埋样本:RIN>4;RNA 浓度≥20ng/μL

        H&E 染色质检标准:

        组织形态、切片完整;样本区域及切片不存在脱片等风险;细胞核相对致密。

        运输条件:

        FFPE 样本:4℃ 低温运输;

        OCT 包埋样本:干冰运输。

        运输注意事项:

        石蜡包埋样本:请标记蜡块切向、编号并完成封装。石蜡块需要固定在石蜡组织包埋盒上(包埋盒规格要求:外圈,长 4 cm,宽 2.8 cm,高 0.6 cm,盒盖高 0.1 cm)

        OCT 包埋样本:包埋过程中一定要拍照留底,这样后期切片时,才好控制组织的剩余量。完成 OCT 包埋后,标记预期的切向、编号并进行封装。

        对于不便于直接邮寄组织块的客户,可自行提前准备质检样本切片及正式样本切片。相关样本要求及注意事项如下:

        FFPE 样本:

        1)RNA 质检样本:5μm/片;切 4 片于 1.5 mL 离心管内,完成标记及封装;

        2)普通玻片 H&E 染色白片:5μm/片,42℃ 水浴展片后,贴于普通玻片的中央,42℃ 烤片 3 h,置于 50 mL 离心管内(或者玻片盒内)密封好,每个样本准备 2 张玻片;

        3)Xenium 正式玻片样本:5μm/片,42℃ 水浴展片后,贴于 Xenium 的正式玻片上,组织区域一定要覆盖在 Xenium 玻片的 SampleArea 内,且切片之间不可有重叠(贴片区域与正确贴片方式如下图所示,需注意贴片区域需严格控制在灰色虚线框内,如果有组织覆盖到超过该框则会导致运行中报错),42℃ 烤片 3 h,置于 50 mL 离心管内(或者玻片盒内)进行密封。

        OCT 包埋组织切片 (不推荐):

        1)RNA 质检样本:10μm/片;切 10 片于 1.5 mL 离心管内,完成标记及封装;

        2)普通玻片 H&E 染色白片:10μm/片,贴于普通玻片的中央,置于 50 mL 离心管内(或者玻片盒内)密封好,每个样本准备 2 张玻片;

        3)Xenium 正式玻片样本:10μm/片,贴于 Xenium 的正式玻片上,组织区域一定要覆盖 Xenium 玻片的 Sample Area 内,且切片之间不可有重叠(贴片区域与正确贴片方式如下图所示,需注意贴片区域需严格控制在灰色虚线框内,如果有组织覆盖到超过该框则会导致运行中报错),将 Xenium 的正式玻片置于 50 mL 离心管内(或者玻片盒内)进行密封。

        10x Xenium 原位检测收样标准

        图 1. 密封工艺图

        切片注意事项

        FFPE 组织:

        1) 切片前将石蜡块置于冰水浴中(超纯水)进行水化 15-30 min 左右;切片时尽量去除组织周围的石蜡。

        2) 切片机保持干净,台面用 100% 酒精擦拭干净,每次切片需要更换新的刀片。

        3) 展片温度要根据组织类型进行摸索,一般建议是 42℃ 水浴(超纯水)进行展片,如果 42℃ 无法使玻片展平,需要调整展片温度,使得玻片完全展片,不能有任何褶皱。

        4) 尽量保证组织切片完整,组织切片一定不能超出区域(10.45 mm×22.45 mm)。

        5) 捞片时尽量缓慢竖直捞起,避免组织和玻片之间有水。

        建议进行正式贴片前,提前在普通玻片上练习,确定展片温度,组织区域大小等。

        注:对于所有样品,请在寄送前自行拍照留底,方便后期与百奥智汇确认组织切片的方向性。

        OCT 包埋组织:

        1) 切片机保持干净,台面用 100% 酒精擦拭干净,每次切片需要更换新的刀片。

        2) 切片前 OCT 组织块和 Xenium 玻片要提前置于切片机预冷,并全程保持低温;切片时尽量去除组织周围的 OCT。

        3) 对于容易冻伤/融化损伤的组织(如小鼠大脑),在收集正式切片之前,先废弃 5-7 张外围切片。

        4) 尽量保证组织切片完整,组织切片一定不能超出区域(10.45 mm×22.45 mm)。

        建议进行正式贴片前,提前在普通玻片上练习,确定展片温度,组织区域大小等。

        检测范围选择

        表 1. 检测范围选择表

        10x Xenium 原位检测收样标准

        关于定制化 Panel,可在 Pre-design Panel 的基础上额外选择多达 100 个基因进行组合。额外的定制需求请提前联系百奥智汇。

        收样地址

        北京市海淀区花园路 2 号 4 号楼中城写字楼 5 层,基因组部(北京)

        备注:Xenium 原位检测技术可基于 Xenium 载玻片与配套设备对石蜡包埋(FFPE)或新鲜冷冻(FF)组织的组织切片进行的基因表达检测。该平台可实现样本靶向、灵敏且丰富的亚细胞水平 RNA 检测,并可提供客制化 Panel 选择。

        10x Xenium 原位检测收样标准

        图 2. 客制化 Panel 选择图

        来源:丁香实验

        ad image
        提问
        扫一扫
        丁香实验小程序二维码
        实验小助手
        丁香实验公众号二维码
        扫码领资料
        反馈
        TOP
        打开小程序