实验问答

21,993,135 科研人在看

科研学霸天团，48小时有问必答

全部

细胞

问免疫组化一般如何设置对照组？

我是金博士

原则上讲，所有实验都应该设置阳性对照（用以检验染色过程成功），阴性对照（用以检验阳性结果为真阳性），空白对照（用以排除非特异背景染色）。不过，由于样本选取的复杂性，国内多数实验室以及国外多数小实验室，都无法做到规范的阴性对照，所以普遍以空白对照代替阴性对照，而这种方法也在国内外得到承认。

2 回答3748 围观

问做QPCR需要跑电泳吗？

修玛杨

紫外分光光度计检测的是RNA的浓度及是否有蛋白、酚类（就是在氯仿离心取上清的时候是不是吸到了中间层和下层，已经酒精洗异丙醇是否完全）的污染，而RNA电泳则是检测提取的RNA这个过程中是否有降解，如果是miRNA还好一些，如果是mRNA，一旦你的目的mRNA被降解了（也就是RNA电泳出现了3条以上的条带或者18s，28s不合格），那后续实验也就没有必要了。所以，我认为，要想出一个靠谱的实验，也为了避

2 回答6590 围观

问PCR 时如果不同组加的 cDNA的总量不一样有影响吗？

phhcrab

管家（内参）基因必须做啊，不然发文章没戏

2 回答2441 围观

问异常PCR条带该怎么处理？

我是金博士

不知道你的目的条带是多大？PCR出现问题是很正常的，一般的解决办法是：（1）摸索PCR条件，优化模板浓度，温度梯度等；（2）重新设计引物。

2 回答1286 围观

问关于 EMSA 探针的选取，该使用已商品化的还是分别设计合成？

丁香通采购助手

可以先咨询一下探针供应商，如果不可行的话，那样也可以请公司合成探针，计算下成本，在去顶方案吧，化学发光EMSA试剂，现在商品话的试剂盒也比较成熟了了，点击看看化学发光EMSA试剂盒

1 回答5312 围观

问双向电泳跑不好啊怎么办？

phhcrab

这个实验比较复杂，要做得好有难度，特别是大胶。样品制备是关键，后续的操作也很重要。试剂尽量用好一点的，不要省这个钱。多向做过的前辈取经，还有可以咨询设备厂家（GE或Bio-Rad）的技术支持。

1 回答924 围观

问蛋白质粉碎

丁香通采购助手

如果要破碎细胞的，现在都是用超声波细胞破碎仪吧

1 回答893 围观

问蛋白如何获取？

我是金博士

重组获得哦，通过基因克隆，表达获得蛋白。

1 回答886 围观

问如果出现非特异性带，可能有哪些原因？

我是金博士

可能的原因有：1、引物设计不合理，出现发夹结构或二聚体；2、退火温度不合适；3、聚合酶质量不好；4、有污染；5、引物不纯或过量；6、模板过量。

1 回答1778 围观

问PCR 和原位 PCR 在概念上有什么区别？

phhcrab

原位PCR是Hasse等于1990年建立的技术，就是在组织细胞里进行PCR反应，它结合了具有细胞定位能力的原位杂交和高度特异敏感的PCR技术的优点，是细胞学科研与临床诊断领域里的一项有较大潜力的新技术。原位PCR既能分辩鉴定带有靶序列的细胞，又能标出靶序列在细胞内的位置，于分子和细胞水平上研究疾病的发病机理和临床过程及病理的转归有重大的实用价值。简单的说原位PCR的样品要像类似于组织切片那样先做下

1 回答1188 围观

问请问目的 cDNA 克隆的鉴定方法有哪些？

吃不饱的猪

还有探针和免疫学荧光转染，酵母双杂交也可以。

1 回答900 围观

问人体皮肤黏膜的真菌如何培养检测？

我是金博士

可以富集培养，然后观察形态，用16sRNA做菌种鉴定。

1 回答1036 围观

问如何提取酵母菌的蛋白质？

我是金博士

可以用一步法酵母活性蛋白提取试剂盒。由于酵母有坚硬的细胞壁，传统的提取采用强碱，使得大多数蛋白产生变性，而玻璃珠法蛋白提取会使得玻璃珠对蛋白产生一定的非特异性吸附作用，导致蛋白质的损失，该一步法酵母蛋白提取试剂采用一种温和型的非离子去污试剂在20分钟内从酵母细胞中提取可溶型蛋白，而且大决数蛋白可以保持活性，通过对毕赤酵母的可溶型蛋白提取表明，该方法提取效率要高于传统的玻璃珠法。本试剂盒可以使用20

1 回答4468 围观

问免疫组化中边缘效应很明显，请问有什么方法可以消除？

我是金博士

沿着同一方向研磨，磨久一点。还不行的话，试试超声。边缘效应很严重的话，可以在板边缘划线，另外，饱和一下溶剂再跑~~让点好样的板现在展开溶剂中饱和15min左右在展开，点样尽可能在板的中心也可以一定程度上减少边缘效应的影响。

1 回答2363 围观

问求问骨髓间充质干细胞培养方法？

我是金博士

按1-2×1undefined5cm2密度接种于25cm2培养瓶中（内有含10%FCS的L-DMEM培养基），于37℃、5%CO2、95%湿度培养箱中原代培养，24小时后首次换液，弃去造血干细胞等非贴壁细胞，以后每2-3天换液1次。当细胞达到80%-90%融合时，用0.25%胰蛋白酶(0.1ml／cm2)消化1-3min，镜下观察细胞变圆、间隙变宽、少量细胞悬浮时，胎牛血清终止反应，按1传2-3比例（1×1undefined

1 回答1739 围观

问请问做裸鼠皮下胃癌细胞系成瘤，接种哪个部位比较合适？

lostree5544

我们选择的是腋窝，作参考哈

1 回答2725 围观

问求指教 PCR 技术与 DNA 序列分析在生物物种保护中的作用？

丁香通官方号

PCR技术应用：研究：基因克隆；DNA测序；分析突变；基因重组与融合；鉴定与调控蛋白质结合DNA序列；转座子插入位点的绘图；检测基因的修饰；合成基因的构建；构建克隆或表达载体；检测某基因的内切酶多态性。诊断：细菌(螺旋体、支原体、衣原体、分支杆菌、立克次氏体、白喉杆菌、致病大肠杆菌、痢疾杆菌、嗜水气单胞菌和艰难梭菌等)；病毒(HTLV、HIV、HBV、 HPVS、EV、CMV、EBV、HSV

1 回答1655 围观

问胃癌裸鼠原位种植转移模型的建立方法？

1084 围观

问PCR 的异常条带是为什么？

我是金博士

你是按文献的引物P的吗？首先PCR设计引物也不是太难，完全可以自己做；其次很多文献上的引物甚至基因不一定是对的，还是要根据NCBI里面的来；最后针对您的情况，可以再优化下条件PCR，还是不行的话，不要纠结，重新设计引物吧，这样快一点。

1 回答2032 围观

问利用加尾法 real-time PCR 方法检测 miRNA，PCR 上游引物设计有什么诀窍和原则吗？

phhcrab

1.不太明白你说的第一种方法，是直接miRNA反转录吗，cDNA跟miRNA一样长吗？因为miRNA片段非常小，PCR检测会比较困难。2.你说的第二个方法可能就是环状引物法，就是反转录的引物带有一个环状结构的，反转录后，环状结构会打开，就相当于是把原来的片段延长了，这样后续PCR就好做了，用SYBR Green或者探针检测都可以。现在这个方法用得很多，很多做miRNA检测服务的公司用的也是这种方

2 回答3944 围观

关于丁香通

公司信息

个人用户

企业机构

无忧采购轻松科研

提问

扫一扫

实验小助手

扫码领资料

反馈

TOP

打开小程序