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        流式细胞仪标本的制备的具体步骤是什么?

        相关实验:活细胞免疫荧光技术-流式细胞仪标本的制备

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        梦醒释然2018

        求具体步骤
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        1 个回答

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        我是金博士

        有帮助
        1.收集细胞。上皮细胞需要蛋白酶消化,然后收集。加PBS或者流式洗液 1ml ,振荡,1400rpm 离心5min ,弃上清。

        2.染表型悬浮细胞于100ul体积,细胞浓度约为或者小于 1X10^6,加入流式染色抗体。按照说明书用量或者减半(根据经验)。分出一管作为同型

        3. 4度 ,避光30min, 用PBS 洗一遍,1400rpm 离心5min ,弃上清。

        4. 破膜破膜剂 以BD pharmingen 破膜剂为例,加300ul 4度 ,避光30min以现配的破膜洗液 1ml 洗一遍。1400rpm 离心5min ,弃上清。

        5.胞内染色加入流式抗体 4度 ,避光30min。用破膜洗液1ml 洗一遍,1400rpm 离心5min ,弃上清。

        6. 加入200ul 1~2%多聚甲醛 4度 避光保存。一般情况下,可直接把抗体加入到弃上清后的残留液里(体积大概为50ul左右)。

        以上是我们实验室的操作步骤。一般情况抗体都附带的染色步骤,可以作为参考。
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