实验问答

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科研学霸天团，48小时有问必答

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问这个模型可否用于检测肿瘤免疫细胞及免疫因子？

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可以的，我们就有同事就做的

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问实时荧光定量 PCR 一定要设标准品吗？ΔCT 和 ΔΔCT 哪种方法好？

prime0711

我用的是ΔΔCT，没有用过标准品

4 回答2529 围观

问脱片产生的原因是什么？如何防止脱片？

口贝力15206

由于免疫组化过程长，组织切片长时间浸泡在缓冲液和试剂内经过多次冲洗浸泡和作用，尤其是在抗原修复过程中，由于高温、高压、辐射等因素的影响，极易造成脱片

4 回答6071 围观

问定量PCR的扩增曲线不平滑是为什么？

gjh731

1，体系不稳定，加大体系，2，如果是国产试剂的话可能这种现象算正常的，因为每次循环完后读荧光时，国产的染料不一定每次都结合的到DNA上，因此即使扩增出片的，也可能因为染料无法结合到DNA导致荧光值上下波动。3，引物扩增效率不高，非特异性不强，4，延伸出问题，可以考虑72度延伸时间增长，

3 回答4005 围观

问siRNA转染后目的蛋白没有减低是为什么？

alaling

siRNA的直接作用（如果有作用的话）是抑制目标mRNA的表达，所以你应该检测DMT1的mRNA的表达情况，如果mRNA也没有低表达，说明该siRNA设计的不行。你检测蛋白的表达不太科学，毕竟蛋白和mRNA之间还有一道“翻译”的墙隔着，两者的上下调并不一定完全一致。

3 回答8614 围观

问有时片子上的组织有裂纹，是脱水时间太长的缘故吗？

akitten

有可能也有可能是二甲苯透明时间过长拿出后封片速度较慢片子在空气中已干燥的话就会容易有裂纹出来

3 回答1639 围观

问蛋白表达量低，并且多是包涵体形式，请问，如果做EMSA，该怎么办呢？

bylvjing

我们最近也在做这个，做了一个月，各种优化原核表达的条件，还是多数以包涵体的形式存在。处理方法：1、换载体，我们用的标记基因蛋白可能大了，把GST换成了His，不知道结果怎样。2、用Thermo的试剂盒，它能把包涵体中的蛋白复性，但是价格也不便宜3、技术指导说可以用上清直接和探针结合，毕竟还是有上清还是有少量可溶性蛋白的。不知道对你有没有帮助，你可以试试

1 回答3068 围观

问有谁做过检测血浆（或者血清）样品中的小rna的表达差异的，检出率高吗？

senjie2008nju

血浆miRNA检出率其实挺好的，就是血样的处理、一些细小的实验步骤对实验结果的影响很大。我做了一些血浆miRNA的检测有兴趣我们可以讨论啊。

1 回答3442 围观

问水通道蛋白如何提取呢？

塞舌尔墨宝

提取总蛋白，上样检测，利用特异性抗体就可以把你需要观察的对象区别出来

2 回答1561 围观

问请教免疫组化染色的问题

ykq08

我以前做HE染色的时候，如果染色过深的话会在75%酒精里面浸几秒钟，然后颜色就变浅了，你的会不会是因为酒精脱水造成的呢，仅供参考

2 回答2067 围观

问在什么情况下使用TritonX-100？

苹果嘿嘿

核染时使用

1 回答1001 围观

问我的菌落 PCR 一直做不出来，一直没有找到原因，希望大神帮忙给点思路~

我是金博士

这里的问题很多：1、连接后有没有跑过条带，是不是已经连上了？2、如果连接产物，跑电泳有条带，再转化后没有条带，说明转化有问题，培养时间多长？Amp抗性筛选，容易出现卫星菌落，严格控制时间在12-16h，尽量多挑几个菌落PCR。3、诱导不出，是很正常的，需要摸索最佳诱导条件，可以参考文献报道的诱导条件，然后摸索。比如改进诱导剂浓度，温度梯度，诱导时间等。

1 回答5552 围观

问苯胺黑染色的原理是什么，具体怎样操作？

wumh1989

可以看看细菌的带电性，苯胺黑染色是负性染色，负染后杆菌和球菌就很容易区分了（直接看细菌形态即可区分）。但这种染色对于较短的杆菌有时也不是那么容易与球菌区分的，就需要根据细菌特性进行相应的化学方法鉴别。PS:负染色法需要使用酸性染料来染色，如伊红或苯胺黑。因为细菌体表面带负电，而酸性染料的色原也带负电，所以色原只能将背景染色。没有染色的细菌在染色背景下就能很容易的观察到。（引自百度百科）

1 回答3585 围观

问做完转化后培养的菌（DH5a）长不大是什么原因啊？

我是金博士

建议你重新做，可以用氯化钙法制备，转化效率不错的。去年2月份的能转化出来还是很奇迹的。一般感受态最多3个月，都不保险。你这样长出来的菌是不正常的，不用纠结了，不要，重新做。

1 回答6084 围观

问Elisa 标本重复冻融使用会影响结果吗？

我是金博士

一般来说，标本拿出后再放回去次日做，效果肯定会有点影响，至于降解应该没那么快。但你标本为啥不分装呢？每次用一支或一管。用完就不要了，就没有这个问题了呀。

1 回答1340 围观

问做转基因鼠鉴定，内参跑出三条带亮度差不多而最后一条带亮度很高，可能是什么原因？

alaling

1.内参抗体质量有问题，不知其他人用起来什么样的。2.内参发光很强，曝光时胶片有移动也会出现你说的情况。3.转膜的时候胶有移位（可能性很小）。

4 回答1448 围观

问流式细胞仪标本的制备的具体步骤是什么？

我是金博士

1.收集细胞。上皮细胞需要蛋白酶消化，然后收集。加PBS或者流式洗液 1ml ，振荡，1400rpm 离心5min ，弃上清。2.染表型悬浮细胞于100ul体积，细胞浓度约为或者小于 1X10^6,加入流式染色抗体。按照说明书用量或者减半（根据经验）。分出一管作为同型3. 4度，避光30min，用PBS 洗一遍，1400rpm 离心5min ，弃上清。4. 破膜破膜剂以BD pharming

1 回答1287 围观

问双酶切后的DNA去磷酸化处理时应该在酶切同时进行还是酶切后再进行去磷酸化处理？

我是金博士

在酶切后的，反应体系不一样的呢。

1 回答3026 围观

问巢式PCR筛查某种病毒两次结果不一致，该怎么办？

我是金博士

重复性不好，就说明实验失败了。重复地出来才行。PCR能出现问题的地方太多了，你感觉你都注意到了，可能有些地方是错觉。我的建议是，看看做成功的人是怎么操作的，这个主要是用来检查你个人的操作习惯。另外，做好对照，一步步排查。引物啊，模板啊，PCR条件等都会有影响。

1 回答1634 围观

问我想测 ERK1/2 的免疫组化，能用 ERK1 和 ERK2 分开的抗体就能达到 ERK1/2 的效果吗？

我是金博士

个人认为还是尽量采取和文献一致的吧。混合使用，能不能达到效果，你可以试试的嘛。另外即使买到的是一样的抗体，也不一定能做的出来。

1 回答1891 围观

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