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实验问答

27,448,866 科研人在看

问如何根据CT值计算分析实验结果？

此用户已注销

内参大概16-22之间吧，太靠后也不好；目的基因，最好30之前，但有的情况，起峰会很晚，最好做无模版对照，即NC对照，NC理论上不会起峰，或在NC之前5-6个起峰的数值可用；

4 回答3848 围观

问有人做过免疫组化，一抗用NF-KB么？求阳性结果图。

伊一1

可以查文献找图，有的公司网站上有对应抗体的图，还有就是找阳性对照组织做，最后建议你弄个阴性对照，就是用PBS代替一抗，这样更利于对比

3 回答2396 围观

问western相关试剂怎么选？

我是金博士

BSA 亚科的我们用3%封闭液我们一般用3-5次，4度保存是的用undefined的洗涤缓冲液，这几个蛋白我们做的多了，easy

1 回答1844 围观

问粪便DNA做荧光定量PCR是否一定需要标准菌株？

helen_gu

做16s吗？可能引物设计比较困难，一般特异性不够，可能会扩出其他的菌

3 回答1539 围观

问蛋白放入-80之前还需要加蛋白酶抑制剂吗？

我是金博士

装冻存，避免反复冻融，尽快检测。不用加蛋白酶抑制剂

1 回答3072 围观

问提蛋白时将同组标本随机两两混合了，即（2con：2处理）。请问这样可以吗？

我是金博士

1、你为啥要这么写在文章中呢。。。2、这样做当然是可以的 3、别人的文献中肯定不会这些写撒

1 回答1627 围观

问从细胞提蛋白，浓度总是不高？

我是金博士

跑电泳染胶看看结果图可以放上来Bradford对很多东西比较敏感，比如urea

1 回答2297 围观

问WB 实验为什么会出现无目的条带？

我是金博士

膜上无蛋白，可能样品降解或者上样量太少了

1 回答2017 围观

问曝光图上可以看到非特异性吸附很多，MARKER 也出现了条带，请问怎样可以改变该现象？

我是金博士

一抗用1:1000，二抗用1:5000试试。

1 回答3311 围观

问我用 CST 的 eNOS 一抗，RIPA(强)提取人脐静脉内皮细胞，做了几次了也一直没出来条带？

我是金博士

eNOS 这个不是很好做，呵呵内参做的很好？转膜后丽春红染膜了吗

1 回答1009 围观

问SD 大鼠的心肌标本，一抗二抗如何选择？

我是金博士

一抗选择能与你的种属来源起交叉反应的二抗选择：如果一抗来源是小鼠，二抗选择什么抗小鼠，以此类推。

1 回答1776 围观

问为什么 WB 实验的目的蛋白发的很慢，而且不太清楚？

我是金博士

1、发光慢，可以考虑换用Millipore的ECL2、15孔上样量有限制，大了会串孔

1 回答1374 围观

问WB 实验中二抗用 TBST 稀释液是否容易出现杂带？

我是金博士

1、稀释液可以放在4度，但是不建议超过一周2、回收的不能超过一周，如果超过一周放到-20冻存。我们都不回收的3、我们用BSA4、二抗还回收呢？我们从来不回收。为什么用TBST稀释会容易出现杂带？5、胶片比膜大6、用剪刀剪

1 回答8950 围观

问做目的蛋白时压出来都是白板，不知道为什么？会是目的蛋白的一抗有问题吗？

我是金博士

1、调整一下GAPDH一抗的浓度，试试1:10000,20000另外二抗也可能会带出杂带，你可以做一个不加GAPDH一抗，其他均加入的对照。2、这个不能直接断定一抗有问题吧，先确定你的系统是稳定再考虑一抗问题。

1 回答1094 围观

问Western 经常出现白板，连内参都不出来？

我是金博士

缓冲液的pH值，注意调教一下pH计

1 回答1654 围观

问SDS 凝胶上样缓冲液中样品不算体积吗？

2061 围观

问兔源和鼠源抗体在制作上有何区别吗？

2543 围观

问内参不显影，或者曝光30分钟才可见模糊的显影，请问是什么原因呢？

3578 围观

问WB看不到条带？

1684 围观

问内参一直就几个样本条带清晰明显？

2 回答2072 围观

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