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实验问答

28,837,658 科研人在看

问我最近做western的内参条带特别好，背景也很干净，但是目标蛋白要么没有条带，要么有条带但是背景很脏，为啥呢？

我是金博士

1、内参与目的蛋白用的是相同的二抗吗？2、洗膜3min，5-6次3、背景高，调整二抗浓度4、时有时无，请在转膜后用丽春红染膜

1 回答4524 围观

问目的带做出来了，但是为什么膜的内参一直都没跑出来？

我是金博士

1、样品中无内参蛋白表达。 2、内参不能识别你检测的种属的样品？

1 回答2326 围观

问为什么 WB 实验的目的蛋白发的很慢，而且不太清楚？

我是金博士

1、发光慢，可以考虑换用Millipore的ECL2、15孔上样量有限制，大了会串孔

1 回答1397 围观

问蛋白提取总是出现问题？

我是金博士

1、50-100ul，看细胞沉淀的多少而定2、细胞太少了？细胞中DNA含量比较大，如果有条件，用超声处理一下就好了

1 回答1845 围观

问WB 实验中二抗用 TBST 稀释液是否容易出现杂带？

我是金博士

1、稀释液可以放在4度，但是不建议超过一周2、回收的不能超过一周，如果超过一周放到-20冻存。我们都不回收的3、我们用BSA4、二抗还回收呢？我们从来不回收。为什么用TBST稀释会容易出现杂带？5、胶片比膜大6、用剪刀剪

1 回答9044 围观

问胶片定影之后显得有点暗，不够清亮是不是定影液的问题呢？

我是金博士

显影液的问题，10%与12%的胶跑出来的marker位置是不一样的。

1 回答705 围观

问WB 结果的内参非常好，既没有背景条带也亮，而目的就不行，不是没有条带就是背景很高，这又是什么原因呀？

我是金博士

1、任何一个公司的抗体都不是百分之一百的。我认为CST的抗体成功率是目前最高的2、表达量的多少可以看看文献3、CST说明书用的是什么细胞作为抗原呢？如果你手上有可以做个验证。看是否你做的细胞表达少

1 回答2510 围观

问Western 经常出现白板，连内参都不出来？

我是金博士

缓冲液的pH值，注意调教一下pH计

1 回答1680 围观

问为什么用四氯萘酚和 DAB 结合显色后，出现非常多的非特异性条带，而且背景显色一片？

我是金博士

1、直接DAB显色不行吗？2、二抗好像效果不好哦3、先直接用DAB试试，另外确认二抗没有带出来非特异性条带

1 回答3048 围观

问WB一抗二抗配好后4℃保存能多久？一个月怎么样？

我是金博士

1、一抗4度可以在一周左右，加一点NaN3二抗现用现配！且不可加NaN3丽春红不会影响，染完直接封闭，封闭后丽春红就没了。2、一抗是什么？二抗还需要孵育过夜？3、先把内参做好

1 回答18547 围观

问显影时背景很黑，我就洗了两天膜，然后又显影了一次，这次是白片？

我是金博士

最好stripping一下，背景很黑的话需要调整一下二抗浓度。

1 回答2774 围观

问SDS 凝胶上样缓冲液中样品不算体积吗？

2092 围观

问我在做Western Bloting时，加ddH2O稀释成，不知有影响吗？

1829 围观

问想保证上样量一致，那么调浓度时用什么溶剂稀释蛋白浓度呢？

5781 围观

问兔源和鼠源抗体在制作上有何区别吗？

2571 围观

问内参不显影，或者曝光30分钟才可见模糊的显影，请问是什么原因呢？

3644 围观

问WB看不到条带？

1721 围观

问我用的预染marker，转膜时发现完全没有转到膜上，但是胶上也没有marker，这是什么原因呢？

我是金博士

1、这个正常，转膜结果到底如何需要染膜来看膜上的蛋白 2、不能这样来确定 3、这个很奇怪，没碰到，看看你做的三明治是否成功，仪器是否有问题 4、与电压之类是有关系，但是不应该2个泳道的marker，一好一坏

1 回答6581 围观

问虽然阳性样品能染出条带，但以前阳性质粒也没做出来，可能不会是转膜时间问题？

1 回答1570 围观

问内参一直就几个样本条带清晰明显？

2 回答2125 围观

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