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问
血液保存
twoicedragon
将全血离心后取血清-80度保存,全血冻存的话,红细胞会裂解,血清会被红细胞液污染。
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问
蛋白纯化时为什么检测不到杂蛋白?
kedaxiaoyu
穿透里检测也没有蛋白条带吗?敢问你是用什么洗脱液洗脱的,一般都是用咪唑,0.5M的咪唑柱子上的所有的蛋白基本上都就洗下来了(如果咪唑实在洗不下来的话可以用EDTA洗)……至于你所说的纯化得到目的蛋白,这个咪唑的洗脱浓度还得靠你自己去摸索。你说的是蛋白洗不下来,建议你如果是用低于0.5M的咪唑洗的话,可以考虑0-0.5M的咪唑走个短点的线性梯度,可以大概看下目的蛋白洗脱的大致咪唑浓度。
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问
血浆可以做 Elisa 实验吗?
闫棟涵777
紫盖采血器采血后离心结果影响大么
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问
做 IP 的抗体为什么会在 WB 中显现出 IgG 条带?
wyf-525
加入的A蛋白抗体和IgG 抗体,在最后一步的煮样中,被β巯基乙醇破坏了结构,变成了重链和轻链,随后由于A蛋白抗体和你的B蛋白抗体种属来源相同,又被你的B蛋白抗体识别出来,所以显影就出现了条带。
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问
跑WB的内参,只有一个孔没有条带,但是其余的孔都有条带,而且上样量是50ug,怎么回事?
你过de好吗
我的也是,不过我是最后一个孔内参条带没有,跑两次都这样
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问
稳定株real-time PCR检测表达升高1000倍 WB检测蛋白没有明显变化是为什么?
hl16010921
mRNA的量和蛋白表达量不是线性相关的,有时甚至不是正相关的(特别是抑制核糖体的调控因素时常常如此)。WB反应的是蛋白表达情况,mRNA上升1000倍,但细胞不可能将所有的核糖体都用于翻译这个蛋白,另外细胞膜的空间能容纳1000倍的该蛋白吗(细胞膜本身就镶嵌了大量蛋白,细胞大小不变,膜的表面积也就不变)。还有你看看是否可以用该蛋白敲除的细胞作空白对照,现在无法排除质粒本身会影响该蛋白的內源性表达。
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问
大鼠肠粘膜组织的蛋白(例:occludin)如何提取?现在用的凯基全蛋白提取液G250,用哪种loading buffer?
Sherlock4ZFB
你好,我想问一下你做的肠粘膜组织是怎么提的?直接划下来吗?还是有其它的方法,能否告知一下?
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问
ChIP 中收细胞一定要用刮刀吗,可以用胰酶消化收集细胞吗?
越努力越幸运AKSR
分析纯就是37.5%
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问
请问负二十度冰箱过夜存放的蛋白可以做co-ip吗?
dxy_m8i2olu4
这不会破坏蛋白间的相互作用吗
3 回答
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问
求问大肠组织标本保存条件及方法?
emily_cby
是否需要加rna保护液
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3307 围观
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问
细胞培养上清中的蛋白浓缩后再煮沸,成了豆腐渣一样的东西是为什么?
远航TAJI
说明过表达组培养基中有很多蛋白,分泌性蛋白就是大量存在于培养基,与对照组比较有区别,很正常的啊!我想问,你用什么耗材浓缩的培养基????
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问
肺腺癌 p53 免疫组化用什么抗体好?
2172 围观
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问
干扰多久再流式上机啊
鹏21PE
1、通过荧光定量或WB检测确定siRNA是否干扰成功及其时间点,干扰效果一般根据siRNA转染剂量而有所差别; 2、根据确定的时间点,添加凋亡诱导剂,进行流式检测。
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1351 围观
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问
为什么膜需要减成多段?
鹏21PE
不同蛋白大小不同,膜剪成多段可以同时孵育多种抗体。
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871 围观
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问
使用磁珠拉蛋白,会不会使蛋白彻底降解掉?
wyf-525
有就是有,没有就是没有,我们实验室很多人都用不加抑制剂的裂解液洗,只要你的速度赶上蛋白变性的速度就行。
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1655 围观
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问
关于封闭,转膜后封闭,不会影响目标蛋白与一抗结合吗?
鹏21PE
1、封闭液蛋白一般是牛乳清蛋白或牛血清蛋白,目标蛋白和一抗种属均不是牛或不抗牛蛋白时,封闭液蛋白不与目标蛋白或一抗发生结合反应; 2、封闭液蛋白只结合于膜上没有任何蛋白的区域,避免一抗与膜结合。
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问
微球菌核酸酶实验 DNA 电泳一直观察不到 200bp 是为什么?
dxy_gm4sarl3
我是先低渗缓冲液处理细胞,然后取沉淀,直接加入微球菌核酸酶缓冲液和微球菌,
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问
最后溶解样品用 DEPC 水量多少合适?
dxy_za0jbge8
动物组织或者血清最后加15+20μl
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问
Si-RNA 脂质体 lipofectamine-iMAX 转染,敲除基之后能维持多长时间?
xy05
siRNA是瞬时的,一般72小时
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问
同一特异不同退火温度的 PCR ,如何确定最佳温度?
王二狗爱科研
温度越高则条带越暗,再高就没条带,我做过
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