实验问答

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科研学霸天团，48小时有问必答

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问做免疫沉降能否使用不同公司生产的抗体？

changhao6787

能不能做IP要看抗体说明书，有适用范围；磷酸化和非磷酸化MW差不了这么多，基本是一致的，你可以看看sigma是不是对于截短的蛋白跑wb的，具体你目标蛋白的分子量（MW）你可以在NCBI上或是文献途径确定一下，没有要求鼻血用一种公司的抗体进行试验。

6 回答3708 围观

问原核表达目的蛋白分子量小于GST标签蛋白是为什么？

detaibio

原核蛋白表达与纯化实验所表达的目的蛋白大多数是以包涵体的形式表现，有些蛋白可以通过降低温度，加快实验速度来改变表达情况，使蛋白表达为可溶性上清蛋白，但是最有效的还是做包涵体复性，这是比较稳妥的，可获得可溶性蛋白的方法，只是活性上会有所降低。

3 回答4004 围观

问肝细胞 HL-7702 要怎么培养？

amyliu33

如果回输给人类，要用无血清的培养基。肝细胞为多边形，贴壁培养。

7 回答2575 围观

问求高手指点 WB 曝光为什么出现反影？

lostree5544

最简单的方法就是换下试剂，之前我们也是遇到了麻烦，百思不得其解，老板给的意见，结果就这么出结果了.请问你片子是机器洗出来的，还是手工的呢？

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问细胞逐步冻存，放置时间稍长有问题吗？

我是金博士

既然要求-20°20min，那你为啥40min呢？这个时间是个经验值，具有普适性，但也不排除个体差异性，看看细胞有没有破坏，就知道这样行不行了，20min只是个大概值，你可以比较一下嘛，就有结果了。

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问刚买回来的抗体，如何对它的质量好坏进行评价？

caiyunmm

哦哦，一般都做什么重复验证实验啊。。有文献推荐么。。

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问构建的原核表达载体不表达我的目的蛋白是为什么？

cpu2004

做个mRNA，如果mRNA水平就有问题加融合伙伴，尝试在C端（优先）和N端加入融合伙伴，有时候是某些蛋白的mRNA在你的表达系统中不稳定

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问原代大鼠神经元培养为什么会染菌？

yyygo

黑胶虫不会使培养基产生明显变化，而且对细胞的生长也不会有大影响，一般细胞生长好的话，黑胶虫会自动被抑制，菌液变浑浊变白是染其他菌了，而且是原代培养，染菌的主要事项要注意很多了，可以看一下网上很多文章吧

3 回答2207 围观

问蛋白可溶性不好怎么办？

detaibio

对原核表达蛋白的活性有较高需求的话，建议先判断表达条件，对表达条件优化，如降低温度，提高IPTG浓度等；最后再采用包涵体复性的方法来重折叠蛋白

2 回答2218 围观

问慢病毒在成纤维细胞过表达IL-32，看其对细胞增殖凋亡的影响体外，买现成的人成纤维细胞，若不建立稳转的细胞，能说明实验的有效性吗

yyygo

慢病毒在成纤维细胞过表达IL-32，看其对细胞增殖凋亡的影响，不进行稳转细胞系构建，也能说明实验的有效性吧对细胞增殖凋亡的影响短时间的3-4天可否满足如果可以就不必进行了，那个时间太长了要持续半年耗不起

1 回答2969 围观

问感受态制备不出来是为什么？

detaibio

做大肠杆菌蛋白表达试验中，感受态的制备主要与以下几个因素有关：1．细菌的生长状态：实验中应密切注视细菌的生长状态和密度，尽量使用对数生长期的细胞（一般通过检测OD600来控制。DH5α菌株 OD600为 0.5 时细胞密度是 5 × 107/ml ）；2．所有操作均应在无菌条件和冰上进行；3．经 CaCl2处理的细胞，在低温条件下，一定的时间内转化率随时间的推移而增加， 24小时达到最高，之后转化

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问CBA 的两种试剂盒检测结果之间是否有可比性？

吉小思

有可比性的，因为这两种盒子都是通过荧光强度反应浓度的。

1 回答1616 围观

问哪里可以买到细胞侵袭实验（划痕实验）所用的放在六孔板里的十字形架子？

yus_us

我知道！不就是ibidi的耗材嘛～有2种哦，一种是伤口愈合插件，一种是4孔插件/4孔插件培养皿。

1 回答2088 围观

问为什么我的感受态制备不出来？

detaibio

影响大肠杆菌蛋白表达实验中，感受态细胞转化效率的因素及实际操作过程中应注意的事项：1．细菌的生长状态：实验中应密切注视细菌的生长状态和密度,尽量使用对数生长期的细胞（一般通过检测OD600来控制.DH5α菌株 OD600为 0.5 时细胞密度是 5 × 107/ml ）；2．所有操作均应在无菌条件和冰上进行；3．经 CaCl2处理的细胞,在低温条件下,一定的时间内转化率随时间的推移而增加, 24小

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问western blot 背景深哪位大神知道这种水泡样的背景怎么去除

1020 围观

问悬浮细胞怎么做呢？

2700 围观

问关于软骨细胞

1342 围观

问western Blot 检测心肌中，模型大鼠处死后取心肌组织，怎样提取细胞蛋白？

fmmuzhangfuyang

1.大鼠处死后剪取心脏，迅速用4摄氏度预冷PBS洗净血液，液氮速冻后移置负80摄氏度冰箱冻存2.提取时按照每毫克组织加入100ulRIPA裂解液，然后机械匀浆，12000r/min离心抽取上清，按照体积比1:4加入5乘loading buffer，95度10min，即可用于WB检测3.其余无特殊按照WB步骤进行

1 回答2355 围观

问spinner flask 细胞悬浮培养瓶如何清洗？

remote1129

spinner flask的瓶身和盖是要分开处理的。玻璃瓶身要用专用洗涤剂CIP100浸泡三小时或以上，然后用自来水和蒸馏水各洗三遍，特别要把洗涤剂清洗干净，烘箱烘干。塑料瓶盖用4%的NaOH溶液浸泡半小时，蒸馏水清洗干净，烘箱烘干，然后将瓶盖和瓶身组合好用锡箔纸包好，灭菌灭菌半小时就可以用了。

1 回答7677 围观

问使用脂质体瞬时转染，预实验是用空载体还是含有目的基因的载体做呢？还是两者都用

yyygo

脂质体细胞转染用目的载体做，预实验也相当于是摸索条件的了

1 回答3518 围观

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