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问
为什么同一批次提取蛋白跑出的条带不一致?
dxymuchong
我可以这么理解吗:内参稳定说明上样量稳定(应该大致是一样的),所以不存在什么上样量不一样的问题;出现这样的结果,问题出在每一步都有一定的可能性,比如电泳,转膜,敷抗体,显色等等。但据我所知,WB最关键的还是转膜和敷抗体步骤,可能是你敷抗体的时候敷的不均匀。我的建议是你再认认真真,仔仔细细做几遍,很可能重复性就做出来了。只是个人观点。
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问
电泳时条带跑出凝胶,是什么情况?
我是金博士
这是你跑电泳时间太长了。
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问
real-time PCR 与 reverse-transcription PCR 有什么区别?
woodeygao
reverse-transcriptionPCR是把提取的RNA逆转录成为cDNA,RNA——cDNA,靠的是逆转录酶;RT-qPCR,Real-Time定量PCR,是用来扩增DNA,和普通PCR方法不同是加入了荧光染料(楼上说的SYBR只是一种),通过检测器检测到荧光信号变化来对扩增的DNA进行定量,DNA-DNA,靠的是DNA合成酶和DNA外切酶。简单来说reverse-transcripti
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问
没有用盐酸分化有什么影响啊?
diudiu2006
盐酸分化只是将残留在胞质中苏木精洗掉,使胞质胞核的界限更加明显。与DAB上色没有关系。怀疑你的DAB显色没有成功。
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问
细胞免疫荧光
浩ert
注意一抗浓度
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问
怎么通过一张片子上的条带就知道它的分子量?
joson12345
发光marker啊,曝光时和目的蛋白同时显影,而且分子量相对预染的要更加准确。
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问
western blot中,如何运用凝胶成像系统照相?加完二抗用TBST洗之后该做什么准备?不想用胶片显影了
dxy_9qshwa77
请问那个bio-rad成像系统怎么拍这个照片呢?
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问
二抗孵完后不及时曝光,应存放在哪里呀?
windy609473269
只要用TBST泡着,放四度冰箱就可以了
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问
荧光定量 PCR 的退火温度怎么设定?怎样摸索?
dxy_ivfir56
请问做退火温度梯度pcr是用引物跑普通pcr还是跑荧光定量pcr
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问
大肠埃希菌能使甘露醇,蔗糖,麦芽糖产酸产气吗?
云天昊
这个是应该是可以的
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问
实时定量PCR探针法和染色法的区别
常安iron
探针是特异性的,染色法是非特异性的
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问
请问为什么我提蛋白的时候蛋白浓度总是很低?
joson12345
可以少加RIPA,或者把贴臂细胞消化下来后取细胞沉淀再加裂解液,看能否提高浓度,能杂出条带就有希望,每次都做内参,同一张膜做,看下趋势是否还是随机。
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问
为什么 WB 做出来是白色的条带?
应用场景
二抗浓度或者目的条带丰富过高,很快消耗了底物,所以形成了白色条带
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问
WB曝光出来白色条带?
极客医生
如果是用的ECL话,可能是信号太强了
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问
为什么我转完膜后,膜上没有任何条带,连 marker 条带都没有?
tobepan
连marker都没有?1.考虑转膜液的问题,是否过期失效?是否加甲醇?是否在低温条件下进行转膜?2.考虑转膜装置的问题。黑面在下,依次是海绵垫,滤纸,凝胶,PVDF 膜(膜一定要和胶贴好,不要有气泡),滤纸,海绵垫。3.转膜条件设置是否合理。我们实验室条件是 200mA,90min。供你参考。
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问
Trizol提取淋巴细胞总RNA我在提RNA时,可以从-80℃里面拿出来再多加点Trizol 把不溶的沉淀再溶吗?
年华可可
收集好细胞以后,1mL PBS洗一次,然后去掉PBS的时候用移液枪吸出上清900uL以上,之后再把细胞沉淀吹起(留少量液体比较容易吹散细胞,而不是大量液体去吹打),然后再加Trizol,vortex剧烈震荡一分钟,500万个细胞不算多,应该没有问题的
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问
求问各大神,WB 跑出来的带子连成一条直线是怎么回事?
joson12345
样品制备的问题,如果样品粘稠的话,用全能核酸酶处理一下。
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问
能够扩出目的条带但是特别弱是为什么?
dxy_hzlavip2
我也是扩不出来,请问最后怎么解决的?
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问
目的条带位置处却没有条带,出现很多杂带,分子量大小小于目的蛋白,这是怎么回事呢?
瓦塔瓦塔嘿
请问您这个问题解决了吗
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问
请问做泛乙酰化 WB 有哪些需要注意的地方?
dxy_74nqjka4
你好 泛乙酰化是体外检测某个酶是否具有乙酰化活性的方法吗?
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