请问为什么我提蛋白的时候蛋白浓度总是很低？

本人做 wb 几个月了，之前一直在做小鼠组织的 wb，蛋白浓度一直都在 10mg/ml 以上。目前接触细胞已经快两个月了，提了五六次蛋白，最高的浓度只试过在 4mg/ml，通常都是 1～2。硬着头皮做了两三次 wb，有条带但是趋势完全不对，而且十分随机，没有可重复性。（本人已经做过 MTT 摸过条件之类的了） 我做的是 ges-1 细胞 大致方法：六孔板，细胞贴壁十二小时，开始处理。 使用的是 ripa 强裂解液，在使用前加入 pmsf 使其浓度浓度最终为1mM。 细胞先吸去培养液后用预冷过的pbs洗三遍，每孔加入 ripa（含pmsf）150ul，在冰上裂解 40min，期间不停晃动。挂下，取至1.5ml 离心管，13200rmp，20min 离心后取上清。 最后用bsa法测蛋白浓度。（离心之后感觉沉淀很少） 请问是哪个步骤错了还是有可以改进的地方呢。之前试过用培养皿培养细胞，加 200ul 的裂解液，浓度还是很低。简直要崩溃了