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问
为什么做的 Western 最后都没有显出影啊？
wuhao88
在两个实验室遇到过ECL试剂盒出问题，第一次是前人用试剂盒时吸取液体没有换枪头，试剂盒污染；第二次是师兄用下来的试剂盒，开封日期已经2年，最后验证是试剂盒失效，换了试剂盒之后就曝出很漂亮的条带，浪费了我半个月时间。我遇到同样的问题是从头找起的：先用考马斯亮蓝染胶看看胶上有没有蛋白，排除蛋白被降解，如果没有问题，再用考马斯亮蓝染转膜后的膜，可以看到膜上是不是有蛋白，如果还没有问题，就要注意二抗是不是
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问
荧光定量的 CT 值有正常范围吗？
张法丽
一般在15-35左右，如果数值再大，可能这个基因的拷贝数太低了，表达量太少
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问
溶解曲线代表什么意思？
alaling
熔解曲线(Dissociation curve)：随温度升高DNA的双螺旋结构降解程度的曲线。总的DNA双螺旋结构降解一半的温度称为熔解温度（Tm），不同序列的DNA，Tm值不同。DNA中G－C含量越高，Tm值越高，成正比关系（摘自搜搜百科）。白话说来就是因为其中有非特异产物，包含两种以上的DNA序列，所以才有两个峰。当然不排除极度偶然的情况：1.两个序列的熔解曲线一样2.没有目标产物，只有一种非
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问
Chip 实验最后的 PCR 需要注意什么问题？
lh19840703
1. Chip 实验最后免疫沉淀后得到的模板用酚：氯仿或者PCR纯化试剂盒提取都行的，但浓度一般都不会太高，通常在十几到几十ng/uL之间，因为浓度太低，所以纯度（吸光值260:280）也不能准确地测取。最重要的是阳性对照要能在PCR后检查到明显的条带。2. PCR引物设计一般退火温度要相近，分别位于基因组上靶序列上下游各50~150bp左右，最好使靶序列位于PCR产物链的中间位置。正如上面这位同
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问
为什么 IPTG 诱导蛋白表达时没有目的蛋白表达？
我是金博士
这种情况就比较背。一个是可以调整IPTG浓度再试试。要么就是再换个重组子。测序对，不表达，这种情况也蛮多的。
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问
附睾脂肪冰冻切片时如何切好，请教前辈们
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问
抗体保存
alaling
看你本身抗体浓度如何，如果低的话就赶紧用吧，如果像二抗之类比较高的，放一两个月没什么问题
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问
q-PCR有非特异性条带有没有办法在设计引物的时候提高特异性？
健坤免疫组化
现在常用的引物有染料法（sybr green 1）和探针法（taq man探针），taq man探针的特异性非常，但是价格要贵一些，而sybr green 1价格比较便宜，但是会有非特异性扩增，建议试试taq man探针，详细还可参考：http://www.biomart.cn/infosupply/27646868.htm
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问
TUNEL 法检测细胞凋亡可以直接在孔板上做吗？
fly620
做成细胞爬片后，染色，避光孵育会比较方便，六孔板中的细胞不能用油镜观察。
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问
胚胎 RNA干扰是用 shRNA 还是慢病毒？大概什么时期注射？
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问
WB 条带白色，背景脏是怎么回事？
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问
通用引物 ITS4 扩增植物 DNA，为什么一直扩增不出来？
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问
抗体选择问题
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问
大分子量蛋白该怎么跑呀
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问
转膜总是不成功，检测不出蛋白怎么办
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问
动物实验 WB 标本数量如何选择？为什么？
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问
划痕实验
1998 围观
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问
请大家推荐一款好用的转染试剂？
叶子的科研
N2a 也称为Neuro-2a,是小鼠来源神经瘤母细胞,对于外援物进入细胞体内很是敏感，我们实验室在转染siRNA到小鼠神经原代里面使用的是zeta life Advanced DNA RNA转染试剂,转后细胞状态基本没有变化，做wb和QPCR检测有敲低。
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问
琼脂糖凝胶电泳时，maker跑出来了，但是目的条带完全没有，怎么办
前置OTZ
RNA没提好，重来吧
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问
PCR有产物但是电泳无结果是为什么？
alaling
1，marker和引物有条带，说明在跑胶的环节应该没什么问题 2.内参和目的条带均没有，说明很大可能是在跑PCR的环节出现问题，就是没有P出东西。应该在PCR的环节找问题 3.你说电泳无目的片段的条带，是指有其它非特异条带还是根本就没有条带？如果可以，放上图是最好的，大家都可以一目了然，比这里做排除法强的多
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