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科研学霸天团,48小时有问必答
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问
为什么用 ELISA 试剂盒检测样品显色无差异?
jm晶美生物
显色弱灵敏度低。在完成所有实验步骤进行底物TMB溶液显色后,酶标板中孔的显色比较浅,即只有微弱的信号呈现。 出现该现象的可能原因: 1.产品过有效期,试剂没有按规定进行适当的保存。 2.试剂,标准品或者样品在使用前没有平衡到室温。3. 少加了试剂的量或者加入试剂的稀释比例不当。4. 洗板或者加样过程中,酶标物受污染失活。5.孵育时间和孵育温度未达到实验要求。6.洗涤液稀释倍数不符合要求,洗板次数过
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问
PBS 容易把细胞冲散,细胞刚过夜是因为贴壁不牢吗?应该怎么改进?
五里云
划痕要用贴壁牢一点的细胞,一般只能用于上皮,纤维样细胞系。
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问
神经元不长是什么原因?
天颜
1.消化时间长了!跟加什么关系不大。2.PLL铺板没?没有必死无疑!
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问
细胞密度对细胞周期有影响吗?
菜问喵
而且尤其是凋亡检测,如果细胞太满影响会很大
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问
双酶切引物电泳出现两条带是为什么?
dxy_pwq4k4o3
大的一条是载体
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问
我做了好几次 WB,为什么不是什么条带都没有,就是一片漆黑?
我是橙子橙
一片空白的情况下只有Maker条带
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问
如何用 TRIzol 法提取动物血清总 RNA?
L圈圈圆圆圈圈
我用过一款BIOG系列的一步法荧光定量PCR试剂,实验效果不错,价格相对来说也不贵,这个系列有很多产品,染料法和探针法都有。可以试试啊。
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问
怎么样用免疫磁珠法分离小鼠骨髓巨核细胞呢?有特定的试剂盒吗?
极客医生
CD41抗体 配免疫磁珠 加MACS Large Cell column,貌似没有直接偶联CD41的磁珠,但有有巨核细胞分离液啊。
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问
如何选用合适的分离胶?
cardiobalon
12%的分离胶没问题
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问
RNA 提取过程中 RNA 浓度过低是否会影响后续逆转录和 qPCR?
YJMYJ
太低了吧,至少得1000吧
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问
如何确定细胞上清液的待测浓度是否在 ELISA 试剂盒的检测范围内?
小新的铅笔
做预实验,把样本稀释成不同倍数做预实验,从而确定正式实验的样本稀释倍数。
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问
SDS PAGE 蛋白质变性了吗?如果是,为什么可以结合变性了的蛋白?
奇妙能力g
1,转膜时候,自动复性? 2,,一抗结合的是线性表位?
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问
各位分子生物学大神们,麻烦分析一下问题可以么,非常感谢
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问
前引物和后引物温度Tm相差10℃这对引物还可以用吗
极客医生
当然不用啊 说明GC比例不和谐啊
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问
WB 上样量怎么计算?
论文菌
最大浓度x对应体积再➗最小浓度就是最大浓度对应的体积,然后总体积再减去当前体积,等于需要稀释的体积。
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问
请问 SDS-PAGE 实验中出现拖尾的现象是什么原因?
极客医生
marker很清晰,胶应该是没有问题的。样品有问题,可能是蛋白样品发生降解,在上样之前,要把蛋白样品在100度煮几分钟,变性失活。同时改变一下上样量,一次性不要太多。用新鲜样品,最好现煮现跑。
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问
鼠动脉粥样硬化模型取主动脉做切片怎么操作?
论文菌
我们做取主动脉切片时,出于需观察全面的角度,一般取主动脉弓根部,取动脉环,不取纵切片。对于制作石蜡切片,不用考虑脂肪影响,脂肪在有机溶剂中会溶解,最后在切片上展现为空泡状,不影响实验结果观察。
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问
AB抗体检测出来的条带为什么不在一个位置?
极客医生
因为最后跑的是变性胶 所以最大的可能是B比原来的位置小了 我第一直觉会test是不是降解了 A有助于稳定B 遏制B的降解 所以会跑出B的碎片,顺手验证一下就用同样的样load一个继续跑过 把小分子量的区域拉开 看在小分子量的区域能不找到另一部分B,如果B大了 就先矫正一下系统。
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问
RNA提取的时总出现双峰该怎么办?
极客医生
双峰,不知是哪种样子的双峰(左右?上下?),如果是左右可能浓度太低吧,而且不是很纯,导致230值比较高。如果是上下,emmmm,你是不是选了两个值?2)逆转录以后不用测浓度,很好奇你为什么测浓度。举个例子,你把反应完的PCR产物拿去测浓度,无论你的目的基因有没有扩增出来,NanoDrop测出来的浓度都是一样的,也就是说,测浓度是没用的,同理,反转录以后测浓度也没有用。一般是反转录前算好RNA浓度,
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问
枯草芽孢杆菌接种总是污染,怎么办
极客医生
把不带抗性的LB plate 放在超净台里,打开超净台风扇,30min后取出LB plate过夜培养,次日查看菌落数目,若大于2则说明超净台有问题,是污染源。
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