实验问答

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科研学霸天团，48小时有问必答

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问Elisa显色相关问题

小布丁瑶瑶

不同试剂盒的组分混用或替代；稀释后的工作液浓度较高，可能是稀释前未离心或者取液量不准确

3 回答605 围观

问肿瘤疫苗沉渣泛起的原因都有哪些？一定不能使用么？

府宅

疫苗中不溶于水的成分，以混悬液的状态存在。放置久了，瓶底会有少许沉淀，轻轻振摇后，沉淀会与悬液混溶。这是正常情况，不影响疫苗的使用。

3 回答323 围观

问细胞染色背景应该如何降低

府宅

内源性过氧化物酶和生物素在肝脏、肾脏等组织含量很高（含血细胞多的组织），需要通过延长灭活时间和增加灭活剂浓度来降低背景染色；

3 回答482 围观

问树突状细胞培养需要什么条件？

dxywode

在倒置显微镜下观察细胞生长状态：如果没长满，将培养瓶用75%酒精消毒后在超净台内更换新鲜培养液，继续培养。如果细胞已经长满（约80%-90%）则传代后继续培养。

4 回答612 围观

问外周血单个核细胞分选方法的比较

dxywode

免疫磁珠细胞分选法是把细胞用超级顺磁性的(MACS微型磁珠)特异性地标记，磁性标记完后，把这些细胞通过一个放在强而稳定磁场中的分选柱。分选柱里的基质造成一个高梯度磁场。被磁性标记的细胞滞留在柱里而未被标记的细胞则流出。当分选柱移出磁场后，滞留柱内的磁性标记细胞就可以被洗脱出来，这样就完全可以获得标记和未标记的两个细胞组份。

3 回答720 围观

问如果上样量超载，要用什么样的方法增加上样量？如果需要加大上样量使原来弱的条带能看清楚？

府宅

柱超载法，通常指在分离条件不变的基础上增大进样量。超载可提高制备效率，以柱效下降一半或容量因子k降低10%为宜。超载进样的程度取决于分离情况。超载一般分为体积超载和浓度超载。

3 回答373 围观

问免疫组化一抗敷育时间的问题，越长越好吗？有的推荐说至少一小时，通常推荐3小时，避免造成假阴性，如果敷育过夜或者24小时会不会引

dxywode

一抗孵育条件包括孵育时间、温度和抗体浓度，三者之间是相对的关系。浓度是最重要的先决条件，温度决定反应的速度而时间决定反应的量。一抗孵育温度有：4℃、室温、37℃，其中4℃效果最佳。至于孵育时间，这与温度、抗体浓度有关，一般37℃1-2h，而4℃则要过夜。其中，4℃最佳，反应最温和，背景较浅。37℃反应速度较快，时间较短。室温个人感觉不如前两者，条件不好控制。最常见的就是4度过夜这种。

3 回答7984 围观

问跑胶跑成斜线，是胶的问题还是电流的问题

wuli猫宁

胶带跑偏的调整工作，应在空载运转时进行。一般从机头卸载滚筒开始，沿着胶带运行方向，先调整回空段，后调整承载段。调整时，应在一侧进行调整，切勿两侧同时调整，并且一次调整的幅度不能过大，要根据胶带运转情况适当调整。

4 回答443 围观

问肿瘤蛋白疫苗为什么要加强注射一针？

Kimser

疫苗的作用就是增加其含量，含量之所以少也是通过检测，原因在于消耗速率和起始浓度。

10 回答469 围观

问ELISA中用到的试剂都是哪些?

lzy必有我师

1、包被缓冲液：0.05mol/L，PH9.6碳酸盐缓冲液（CBS） Na2CO3 1.59g NaHCO3 2.93g 加去离子水水至900ml，调pH值到9.6,定容到1000ml。121℃，0.1MPa高压灭菌20min后，室温贮藏。 2、磷酸盐缓冲溶液（1×PBS）：0.01 mol/L、pH7.4 NaCl 8.0g KH2PO4 0.2g KCl 0.2g Na2HPO4·12H2O

6 回答1157 围观

问吸附抗体的选择，非稀释，稀释？

dxywode

选择抗体应先了解其反应谱和适用条件（包括适用切片、稀释度及温育时间等）。使用一种新抗体时，必须首先摸索出最佳浓度，所谓最佳浓度就是能获得最佳特异反应所需抗原的最低浓度。或者按照有关说明书的提示。二、稀释1.一般用0.01MPBS，PH值7.2；2.或用0.05MTBS，PH值7.6；

5 回答428 围观

问为什么细胞培养需要用到血清？

bqejjh123

加入动物血清是为了给体外培养的细胞提供一个类似生物体内的环境，此外动物血清中也包含了一些动物的激素和酶,可以促进细胞的发育。

4 回答1352 围观

问做wb实验每次只加一种一抗，可以同时加两种或者多种一抗的吗？

bqejjh123

最好不要，根据抗体而定，只是基础成分一般都是TBST或PBST。抗体说明书会写到底加BSA还是NF-MILK。有钱还可以买专用稀释液，特异性进一步降低，成分可能包括人工合成的肽、明胶、酪蛋白、多糖类等。

3 回答5101 围观

问二抗敷完了发现敷错了，怎嘛办?

bqejjh123

如果敷错了，可以洗一下再敷，不然二抗会污染

4 回答3475 围观

问大部分抗体收到后4 度短暂保存1-2 周对抗体活性有没有影响？如果抗体很快(1-2 周)会使用，推荐在如何保存？

府宅

试剂盒中的抗体和酶在4度可以放半年

3 回答1166 围观

问大家进行细胞给药时，加血清吗？一般正常条件是不是给药都加血清啊？

dxy_gwrp7ndq

还是要看你的细胞种类的，有些细胞生长比较好，并且药物作用时间短可以不加血清的。一般我都是加含5%的血清的。肯定不能等细胞长满板子才加

3 回答4016 围观

问关于免疫荧光细胞效率的问题

府宅

内源性原因就是你的细胞长的太密了。外源性可能是你转染造成的。还有可能更你做一抗二抗有关。

3 回答316 围观

问关于chip-seq或者cut-tag的问题

府宅

ChIP-seq可以不设置生物学重复；如果设置生物学重复，要尽可能增加重复个数。

3 回答717 围观

问免疫共沉淀检测到蛋白信号弱的原因是什么呢？

府宅

抗体浓度太低，应对措施：调整抗体浓度，必要时设立浓度梯度，摸索最佳浓度；

2 回答482 围观

问免疫共沉淀的相关问题

dxywode

在细胞裂完离心之后、加入抗体ip之前吸出来的细胞裂解液。可以在wb曝光时显示目的条带的位置以及比较不同泳道之间用于IP反应的细胞蛋白量。

3 回答508 围观

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