提取同一批小鼠肠道组织蛋白，蛋白浓度都不低，为了调整上样量，都调整了浓度，为什么有些样品连actin 都跑不出来？

肠道组织属于平滑肌，用b actin坐内参不合适，换个内参gapdh试一下

1.蛋白降解了，提取过程中保持全程冰上进行。

2.转膜的时候PVDF膜没有用甲醇活化，导致转膜不成功。

1，蛋白降解了，跑个SDS-PAGE看看蛋白降解了没有

2，上样量不足或抗体浓度不够。如果没有降解，增大上样量，增大一抗浓度

3.在上样过程中上样孔内有异物，没有提前冲上样孔