实验问答

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科研学霸天团，48小时有问必答

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问erastin 是铁死亡激动剂(抑制xc-)，但是为啥能降低Fe2+？机制是什么

土井挞克树

促进铁死亡过程中会消耗掉fe2+

3 回答621 围观

问把六种不同种类的中药材打成粉末，是用乙醇超声提取进行冻干后上液相测含量好点？还是用乙醇回流提取冻干后上液相好？

土井挞克树

回流的话各组分提取纯度要高一些

4 回答262 围观

问用于污水处理可以用哪些藻类呢

huarenqiang5

可以用以下四种藻类:（1)小球藻(2)螺旋藻(3)栅藻(4)硅藻

3 回答827 围观

问请问qpcr扩增曲线溶解曲线都是锯齿状的是什么原因啊？

土井挞克树

实验操作问题：PCR反应管没有盖紧，反应液泄露；PCR反应液有挂壁模板问题：RNA纯度低，扩增信号太弱仪器本身的问题：长时间未校正，荧光不稳定；使用过度，荧光收集不稳定

4 回答938 围观

问蛋白质谱鉴定不成功一般有哪些因素?

huarenqiang5

质谱鉴定不成功主要有两类，一类是质谱效果不好，一类是没有可参考的蛋白数据库。

3 回答476 围观

问哪位大神做过病毒蚀斑纯化吗？可以提供一个病毒蚀斑纯化详细的protocol吗？拜托了，先谢谢大家了！

huarenqiang5

流程1. 铺板将已长满80~90%RDcell消化均匀铺于6孔板中。2. 病毒感染细胞长成单层达80~90%吸去培养液，将病毒做10倍稀释，共做5个梯度，并向每孔中加入200μL 稀释好的病毒液（阴性对照加DMEM200μL ），置于37℃温箱吸附两小时后弃残液。3. 制备2%琼脂糖使用低熔点琼脂糖配方：0.2g 加入10ml 无菌PBS 中，121℃高压灭菌15min ，取出后置于55℃水浴锅中

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问哪些样品需要去除高丰度蛋白？怎么去除？是否需要费用？

小Q医僧

①一般情况下，血清、血浆样品中都会存在高丰度蛋白（白蛋白等免疫蛋白），一定需要去除高丰度蛋白；目前有成熟的试剂盒可以去除血清中的高丰度蛋白。②体液样品，细胞培养液等样品，出现高丰度蛋白的情况也比较高，这类样品，如果出现高丰度蛋白，需要先通过质谱鉴定是否是常见免疫蛋白，然后再采用高丰度蛋白去除试剂盒进行去除。③其他样品存在高丰度的情况不常见，如在实验过程中发现高丰度蛋白，解决方案如上。其他样品可能会

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问WB中Tween-20dl的作用是什么呢？仅仅是复苏抗原吗？如果是复苏抗原，他又是怎么实现抗原复苏的呢

balalaLy

tween20就好像是洗洁精，可以洗掉膜上的杂质

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问请问在提取脾脏免疫细胞之前，把脾脏放置在hbss中等待之后的研磨，那么最长可以放多久保持新鲜再研磨呢？

loveliufudan

一般来说,为了保持组织样本的新鲜度和细胞活力,组织获取后应尽快进行处理。将脾脏放在HBSS缓冲液中可以短时间保持组织活性,但时间不宜过长,通常建议在1-2小时内进行后续处理。具体时间还需要根据样本量和状态来判断。

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问ELISA实验中空白孔无颜色变化，而阴性对照、样本孔及阳性对照组都要颜色，后面验证时发现不加抗

loveliufudan

可能原因有:1. 一抗质量问题。没有经过阴性对照阻断的一抗本身就与其它成分非特异性结合,出现假阳性。2. 洗涤不充分。操作过程中各孔间交叉污染,导致空白孔被污染。3. 孵育条件不佳。温度或时间不当,导致非特异性结合增加。4. 试剂配置问题。如浓缩抗体未稀释至适宜工作浓度。5. 样本中存在干扰因素。样本本身与检测试剂非特异性结合。

6 回答1506 围观

问蛋白质组学中质谱结果蛋白筛选问题？

此用户已注销

蛋白质筛选的方法有很多种,其中最常用的是亲和层析法。这种方法利用蛋白质与其特定配体之间的亲和力,将目标蛋白质从混合物中分离出来。例如,如果我们想筛选出一种与某种药物结合的蛋白质,我们可以将药物固定在亲和树脂上,然后将混合物通过亲和树脂柱,药物与其结合的蛋白质就会被捕获下来。除了亲和层析法,还有许多其他的蛋白质筛选方法,如蛋白质芯片技术、蛋白质工程等。这些方法都有其独特的优点和适用范围,可以根据具体

6 回答1115 围观

问蛋白质样本保存问题求助？

feixue7758527w

原则上低温保存或者液氮保存是可以长久保存的，不会对实验有什么影响的。如果只是常温保存，估计也就是一两个小时的。尽快最好的。

6 回答967 围观

问蛋白质组学中蛋白质谱鉴定的问题求助？？

qzming65

如果没有合适数据库导致鉴定效果差，可以通过更换范围更大的数据库、近源物种数据库，或采用相关研究物种的蛋白、EST数据库等构建本地数据库的方式解决

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问请问，WB中一抗是如何取代封闭液的，一抗与二抗的结合又是通过怎么样进行的，是通过抗原决定簇与互补决定区吗？

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利用一抗和二抗来检测目标蛋白质。一抗是指特异性结合目标蛋白质的抗体,二抗是指特异性结合一抗的抗体。通过这种方式,可以检测出目标蛋白质的存在和表达水平。

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问请问大家，抗体的互补决定区与抗原决定簇是如何决定抗原-抗体结合特异性的？

loveliufudan

抗体与抗原的特异性结合是通过抗体的互补决定区(CDR)与抗原的抗原决定簇(epitope)之间的互补性实现的。抗原决定簇是抗原分子表面特异性三维结构,是抗体识别的位点。抗体分子通过其互补决定区与抗原决定簇进行高度互补的空间结合,就像钥匙与锁孔的契合。互补决定区一般由6个CDR组成,3个在轻链(CDR-L1,CDR-L2,CDR-L3),3个在重链(CDR-H1,CDR-H2,CDR-H3)。这6个

4 回答934 围观

问WB为什么不能选用琼脂糖凝胶跑电泳，而是选择SDS-PAGE跑电泳？

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SDS－PAGE是竖胶，电泳点样孔与电泳方向平行，点样的时候肯定会造成样品分布不均。所以需要一个高浓度的胶来预电泳保证在分离胶的时候所有蛋白处于同一水平。而琼脂糖凝胶电泳时，胶是横着的，点样孔方向与胶的方向垂直，所以加样的时候不会导致样品电泳时不在同一水平。

4 回答1650 围观

问这几个SYBR green I 染料哪个适用于藻类染色啊

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试试第二个，我之前就是用的那个

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问f4/80+以及ly6G+双阳性的是什么细胞？

sswei

f4/80+以及ly6G+双阳性的是单核巨噬细胞。

4 回答8345 围观

问为什么石蜡切片在展片的时候组织总是展不平？

此用户已注销

要注意石蜡切片是否完全干燥，否则展开时会出现不均匀的情况；同时，在制作展片板时，要将切片放置在正中央，并避免空气泡的存在，石蜡切片的厚度影响展片效果、温度和湿度都有影响

6 回答1248 围观

问防御素目的基因怎么找?

dxy_mqg1dtg8

1.NCBI中的mRNA通常是指已经被转录成mRNA的基因序列。而cDNA是通过反转录过程将mRNA转化为DNA而得到的。所以，可以说NCBI中的mRNA是cDNA的其中一条链，但并不是完全等同于cDNA。2.文献中的基因序列比NCBI的基因序列短可能有多种原因。一种可能是文献中提及的基因可能只包含核心部分的序列，而NCBI中的序列可能包含了更多的非编码区域。另一种可能是NCBI中的序列可能经过了

4 回答587 围观

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