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问
蛋白样品可不可以反复溶解?
小暮
最好不要反复冻融 蛋白样品在制备后建议分装,用多少,拿多少
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问
两步法和一步法有何优劣呢?在什么情况下要选择其中一种有没有要求?
bamboopiggy
其实这个要看你的实验目的,单纯的要跑realtime pcr,一步法,两步法都可以。但是如果想同时拿cdna做别的实验,就用两步法。先得到cdna,再跑realtime。一步法简单,省时间。两步法,稍微复杂,但是也不难做。
3 回答
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问
想要精确产量,怎么做RNA定量呢?除了买仪器还有什么方法吗?
bamboopiggy
可以将rna稀释,然后再去测浓度,一般浓度值在1000左右比较好。
3 回答
711 围观
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问
最终PCR反应中假阳性结果,可能是RNA 中存在的基因组DNA,怎么去除gDNA呢?
whilt-shirt
现在有去除gDNA的逆转录试剂盒,可以试试
4 回答
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问
第一次做CO-IP实验,有什么注意事项?请做过的大佬们提提经验避避雷
lyang556
首先明确实验目的,确定抗体和需要捕获蛋白。然后注意研究实验步骤,可以参阅别人的实验经验,少走弯路。选择合适的试剂,操作时要认真,尤其是样本制备和Pre-clearing过程。
3 回答
438 围观
3 回答
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问
湿转转膜时间与蛋白大小有没有必然联系呢?
迟C迟
有关系的,转膜时间太长,小蛋白会从膜中穿过。
3 回答
3465 围观
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问
westerblot条带弯曲怎么办
bamboopiggy
胶配的时候,注意混匀。低电压,延长跑胶时间,跑胶的时候注意降温。
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问
电极法测电解质中直接法与间接法的区别?
dxyv9281
1、ISE的直接法和间接法的区别在于直接法未作稀释直接测定,间接法预先稀释后测定,但是两种方法测定的都是离子活度.2、比较ISE法与火焰光度法之间是存在偏差的,ISE法偏高,造成这种差异的原因是:火焰法测定的是血浆中的钠、钾浓度;而电 极法测定的是血浆或是血清水中的钠、钾浓度。电极法摒弃了样品中蛋白质和脂类等大分子所占体积,也就是称为基质效应,导致了电极 法的结果偏离。对于ISE法中的直接法与间接
5 回答
2226 围观
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问
实验条带为什么会出现断带或者比较特殊的条带?
bamboopiggy
最大的原因可能是转膜的时候没转好,有气泡,或者胶因为太热而变形了或者胶破了。当然也有可能是加抗体的时候,没把膜全部浸泡。或者running buffer有问题,胶配的不匀。
3 回答
559 围观
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问
新买的蛋白溶解液一般用什么DD水吗
小布丁瑶瑶
还是用灭菌的ddH2O好些。用TE后续试验不方便,同时,EDTA会螯合Mg2+,对后续PCR扩增不好!
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997 围观
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问
蛋白跑胶比较淡,考虑蛋白浓度稀释,怎么浓缩蛋白
lyang556
常用的是透析浓缩,可以用透析袋。将要浓缩的蛋白溶液放入透析袋结扎,把高分子聚合物如聚乙二醇(碳蜡)、聚乙烯吡咯、烷酮等或蔗糖撒在透析袋外即可。也可将装有蛋白液的透析袋放入配好的30%-40%浓度的吸水剂中。
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1157 围观
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问
为什么显影时,marker比条带还要显?
迟C迟
本来商业化的marker就更容易跑出明显的条带。目标条带淡说明目的蛋白少,可以调整上样量,marker少加点,目的蛋白多加点。
3 回答
941 围观
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问
跑western blot的时候同一个抗体同一个细胞系或者组织,出现条带数不一致的原因
dxywode
条带位置异常可能是蛋白出现聚体或被修饰,蛋白出现降解有关。
3 回答
1279 围观
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问
chip-seq一般多少细胞满足要求?一般生物重复能做么?
迟C迟
可根据自己的实验设计,在开始实验前计算所需要的 ChIP 反应次数,准备相应足量的组织或细胞。因此,我们建议以⼀个样品组为标准,准备约 100 到 150 mg 组织样品(每个样品组能满⾜同时进⾏目的蛋白抗体、阴性对照 IgG、阳性对照 H3 抗体等多个 ChIP 反应的用量) 。
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2347 围观
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问
蛋白浓度测定除了BSA方法,还有没有其他方法?
天一湖医者
还有紫外吸收法,双缩脲法,BCA方法,Lowry法,考马斯亮蓝法,凯氏定氮法等
4 回答
786 围观
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问
蛋白纯化常形成包涵体而影响表达蛋白的生物学活性及构象,怎么解决?
桐轩456
首先我们要知道包涵体形成是因为外源性重组蛋白在高表达时,由于蛋白折叠辅助因子不足,在蛋白折叠之前分子间连接的疏水表面暴露在外面,导致折叠中间体大量堆积,并且这些中间体对蛋白酶的降解有抑制作用;对于大量折叠错误蛋白的出现,重组细菌体内缺乏相应的反应机制来恢复蛋白的正确折叠;促进细胞表达的蛋白多肽的溶解和正确折叠功能的丧失;蛋白或多肽自身结构在热力学和动力学上失衡;一些环境因素(如高温、酸性介质)能明
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1455 围观
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问
怎样提高蛋白质在醋酸中的稳定性?
天一湖医者
1、尽量在相对密封和无菌的环境下快速进行分离操作2、在生理温度和压力范围内完成分离纯化操3、慎用溶剂和酸、碱、盐类,使用前要进行详细的试验,确定最佳添加量和条件;4、钝化或抑制蛋白质分解酶类的活性;5、选择合适分离方法。如:凝胶过滤、离子交换、吸附层析、亲和层析、电泳、结晶等。
4 回答
692 围观
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问
组织小浓度低时RNA提取纯度问题
迟C迟
肯定影响后续实验的,可以多提几次,富集一下RNA,同时保证纯度,才能保证后续实验质量,不然做了也是白做。
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380 围观
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问
蛋白质电泳图谱精度怎么控制?
wuli猫宁
根据聚丙烯酰胺凝胶薄片上蛋白质电泳带的粗细、深浅和迁移率,绘制电泳图谱,并计算相似率。
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432 围观
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问
PBMC与肿瘤细胞共培养时,PBMC要如何预刺激?如果是用CD28包被的话是怎么包被的?
dxy_gwrp7ndq
可以购买 life technology公司生产的 Dynabeads® Human T-Activator CD3/CD28 for T-Cell Expansion and Activation,货号:11131D,价格: 8011元/瓶。用这个试剂后就不用再包被单抗,也可以进行预刺激
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