实验问答

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科研学霸天团，48小时有问必答

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细胞

问请问链霉菌中做Coip如何保证蛋白活力？

bamboopiggy

做好预实验，尤其是破菌壁时注意低温。可以先按照梯度条件裂了菌，跑个wb看看，然后再进一步做ip

3 回答344 围观

问关于核酸斑点杂交的问题

bamboopiggy

不用要求那么严格，和胶接触的面为正面，你记住你铅笔标在哪一面就好，没有那么严格的反正面。

3 回答479 围观

问难消化的新鲜组织提取出的RNA建库后QPCR不合格，有什么方法可以改善？

bamboopiggy

1.将你的组织，直接放到trizo里，再进行剪碎。2.用液氮将组织冻住后，研钵内弄碎后，再加入trizol。3.买个组织提取rna的kit，可以试试。

3 回答366 围观

问wb实验，一抗二抗怎么选择节约成本，还能得到好的实验结果?

bamboopiggy

一抗可以选大公司的，然后买一抗稀释液，因为里面一般带着防腐剂，可以多用几次。二抗，随便哪个公司都可以。也用一抗稀释液来配就好。

3 回答750 围观

问请问间充质干细胞培养时，细胞（汇）融合度怎么判断？

bamboopiggy

就是细胞覆盖培养皿底部的面积百分比，间充质一般到80%的时候才处理。

3 回答764 围观

问有做过基因编辑的朋友吗？求赐教

bamboopiggy

你买一个现成的质粒系统，然后加入你的sgRNA就可以了，可以去addgene看看。

1 回答713 围观

问哪个牌子的雌激素受体拮抗剂好用啊？

bamboopiggy

AZD9496，应该是阿斯利康产的，有个叫百奥莱博的公司卖

3 回答392 围观

问WB用imageJ分析灰度值，灰色的峰是反的为什么？之前都正常。

110徐璐

打开Image J软件→左上角file→Open 选择自己的条带图片(事先把条带弄正)

3 回答2864 围观

问构建的融合蛋白，为什么看不到红色荧光！

bamboopiggy

你质粒构建的时候,去掉你那个基因的stop code了吗？另外注意rfp的读码框别移位了。

2 回答598 围观

问怎么提高wb结果重复性，并且让杂带少一点

110徐璐

内参稳定说明上样量稳定（应该大致是一样的），所以不存在什么上样量不一样的问题；出现这样的结果，问题出在每一步都有一定的可能性，比如电泳，转膜，敷抗体，显色等等。但据我所知，WB 最关键的还是转膜和敷抗体步骤，可能是你敷抗体的时候敷的不均匀。我的建议是你再认认真真，仔仔细细做几遍，很可能重复性就做出来了。只是个人观点。

5 回答670 围观

问脾单个核淋巴细胞培养及进一步活性分析与分离单个核细胞后直接进行活性分析实验准备和方法有什么不同？

bamboopiggy

进行活性分析，是用流式吧？处理后，直接进行流式就可以。没有什么区别。

1 回答256 围观

问请问鼠源的过表达载体可以转染进293T细胞吗？转染效率如何！

bamboopiggy

可以转293t，并且293t很好转，只要你动作轻柔，不要把细胞弄漂了

2 回答1185 围观

问southetn blot 最后成像时，只有maker是咋回事呀，这个实验失败了好多次，心态崩了。

bamboopiggy

你下次加个阳参吧，如果阳参能出来，说明你的实验步骤没问题，如果阳参都出不来，你可能需要改你的实验方法。

1 回答295 围观

问慢病毒敲低基因，为什么PCR验证时基因表达量反而增高？

bamboopiggy

如果确定你sh没问题，那问题就在你提rna，反转，甚至是pcr的primer上。你为啥不用wb验证konck down呢？

2 回答830 围观

问wb条带弥散怎么回事？

bamboopiggy

你说的是右侧的那一团黑色吗？不是弥散，是你加抗体的时候。不知道怎么把膜给弄伤了，出现非特异结合了。

4 回答2410 围观

问整膜敷泛乙酰化抗体，显影70kDa marker那非常黑，求大神解答，感谢！

bamboopiggy

因为marker也是不同size的蛋白制成的mix，也会和抗体起反应，所以有黑色的条带，你用的是发光试剂显影吧？可能是你的蛋白浓度太高了，把辣根过氧化物酶给消耗干净了，所以反而没有光了，就泛白了

3 回答760 围观

问emsa实验试剂盒阳性对照没有带？

bamboopiggy

膜上的水没干，影响不大，但是你尼龙膜没有活化，影响很大，至少要TBE中活化10min。

2 回答500 围观

问关于THP-1细胞培养问题（悬浮细胞自行贴壁）

丁香实验

我的thp-1前一段时间也出现了类似的问题，当时除了这种细胞，别的细胞状态也不太好。怀疑是污染了。纠结了很久，后来把那一批细胞都扔了，培养液的瓶子也换成了新的（实验室自己配的培养液，自己备瓶子装），复苏了新的细胞。现在thp-1细胞状态很好，背景干净，长的也很快。建议楼主有冻的细胞就复苏新的吧。状态好的时候多冻些——后面细胞状态可能是您手法问题（主要是血清问题最重要，您列的血清应没问题，要是黄色的

3 回答6590 围观

问PCR退火温度应该怎样设定？

luoxinlong

根据我的经验, 如果上下引物Tm值差不多的情况下,退火温度设定比Tm 低三度就可以。但如果两者想差比较大,差5度以上吧,有两种策略,取中间温度,或者进行梯度PCR. 梯度PCR很靠谱的,他的温度设定: 低温=低的Tm-3 高温=高的Tm+3。梯度PCR 你一般拿不到条带的话就要考虑引物和模板的问题了。

2 回答6203 围观

问R package DESeq2中在差异表达分析那一步怎么得到正确的比值

3249 围观

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