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问
免疫荧光怎么看共定位呢,merge之后有跟DAPI交叠的,也有没有与DAPI交叠的,那这个目的蛋白是表达在哪里呢?
xuchanglu88
其实你看到的文献中大部分是在表明这个蛋白是表达在细胞核,但是具体到表达在细胞核的哪个部位,那则需要更高维度和分辨率的方法去回答。在很多时候,你能够看到你的目的蛋白merge之后与DAPI的交叠就在一定程度上说明目的蛋白表达在细胞核,但要是再探究是核里的哪个位置,那就需要更高分辨率的技术手段了。
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问
q-PCR 有的组织样β-actin有双峰,有的组织又没有这是为什么鸭?求解答
dxy_gwrp7ndq
可能是beta-actin基因特异性不强,荧光定量PCR对引物的要求很高,就导致双峰
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问
酶切反应混合物的体积是否对酶切效果有影响?为什么?
府宅
有影响,加入反应的酶体积不超过反应总体积的1/10,避免限制酶活性受到甘油的影响。大多数限制酶贮存在50%甘油溶液中,以避免在-20℃条件下结冰。
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问
怎样查找miRNA与蛋白的结合位点
xuchanglu88
这个可以通过生物信息学方法和实验方法,对于生物信息学方法,可以选择TargetScan和miRnada;而实验方法则可以通过免疫沉淀、干扰你的miRNA后检测基因的表达变化等。个人建议先进行上面提到的或者你自己查到的一些软件进行预测,然后再结合实验手段进行验证。
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问
各位大佬,鉴定大肠杆菌O抗原血清除了凝集法,还有其他快速的方法吗?
dxy_gwrp7ndq
酶联免疫吸附试验(ELISA)方法进行检查。
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问
做实验需要的抗体如何制备?
天一湖医者
抗体的制备为了研究抗体的理化性质、分子结构与功能,以及应用抗体于临床疾病的诊断、治疗及预防都需要人工制备抗体。目前,根据制备的原理和方法可分为多克隆抗体、单克隆抗体及基因工程抗体三类。一、多克隆抗体 大多数抗原是由大分子 蛋白质组 成,但只是抗原上有限部位的特殊分子结构能与其相应抗体结合,称此部位为抗原决定簇(antigenic determinant)或表位(epitope)。一种天然抗原
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问
大肠菌群实验结晶紫培养是阳性,需要煌绿乳糖胆盐肉汤实验验证吗
Topmicro
需要,从结晶紫中性红胆盐琼脂平板上挑选可疑菌落分别接种到煌绿乳糖胆盐肉汤管内培养,观察产气情况进行验证。
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问
原代细胞传代后出现杂质
天一湖医者
黑点的出现可能与以下几种情况有关: (1)细胞生长过老,破碎的细胞残骸; (2)血清质量不好,反复冻融的结果; (3)配制培养基的pH值偏高,不宜细胞生长; (4)培养原代细胞中出现小黑点,可能是原代组织中的杂质,多次传代可以消除。
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问
为什么co-ip空载/IgG组也有条带?
府宅
可以降低Ig抗体量,缩短了实验和对照组的时间
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问
铺板细胞聚集在中间是为什么呢,如果用这样的板转染会咋样呢?
whilt-shirt
铺板后需要画8字,不管横8或者竖8,如果细胞未铺匀会影响转染效率
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问
想问一下从PBMC中分离的NK细胞体外培养扩增发育的方法(除用工程细胞K562外)
天一湖医者
将 PBMCs 和偶联有 NKp46 单抗和 CD2 单抗的 Cloudz™ 凝胶微珠共同孵育,该步骤将激活 NK 细胞,进行扩增。
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问
求载体构建的完整步骤和需要注意的事项哇
dxy_gwrp7ndq
载体构建的注意事项:1.连接反应是 DNA 重组过程中的关键步骤,其成败的重要参数之一就是温度,因此要控制好连接温度。2.进行黏末端连接时,会产生一定数量的载体自身环化分子,导致转化菌中过高的假阳性克隆背景。针对这一问题,常采用牛小肠碱性磷酸酶( CIP )去掉载体的5’﹣磷酸以抑制 DNA 片段的自身环化。
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问
为什么我600+bp的模板pcr出来1200bp的片段,还找不到多余片段来源?
bamboopiggy
你的模版是质粒还是genomic Dna?你换过引物,说明你也怕引物match不上,要不你试试缩短extension的时间?
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问
asc寡聚化实验总是有问题😭
bamboopiggy
将沉淀重悬于 50 μl CHAPS 缓冲液中,其中含有 4 mM 辛二酸二琥珀酰亚胺(溶解在 DMSO 中)。在室温下孵育 30 分钟以交联蛋白质。在 4 °C 下以 5,000 x g 离心 8 分钟,弃去上清液并将沉淀重悬于 30 μl 的 2x 蛋白上样缓冲液中。在 95°C 下加热样品 2 分钟。应该就可以
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问
蛋白条带的问题求助,各种有问题的条带
喵喵喵柏
不知道你具体的问题是什么第一张图的右下角你应该是有一个气泡,所以条带上面有一个小白点如果你的问题是他不是单个的条带,有很多条带的话,需要看一下你的抗体是不是多克隆的剩下的几个你可以调整一下,把背景跟条带的对比度调的大一点最后两张膜你应该是发光的时候折了一下膜,膜上有折痕就会出现这种印记
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问
碧云天核蛋白提取试剂盒提取后为什么跑wbnrf2蛋白无条单laminb也没有?
bamboopiggy
1.你跑whol lysit的对照了么?对照有条带吗?2.这俩抗体你以前用过吗?切的位置对不?二抗有没有用错?现在提核的技术很稳定,碧云天的盒子应该可以用,不行的话,你买个thermo的盒子试试。那个我用过,没问题的
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问
菌液OD600 在0.6-0.8之间表明细菌处于log 生长期?
Topmicro
通常所说的菌液OD600=0.6-0.8是在紫外分光光度计使用10mm光程的时候测定的,如果使用酶标仪测定的话注意校正换算。
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问
预染marker是怎么操作的呀?请问
biotides001
各厂家都有说明书,可以参照说明书或者问师兄师姐
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问
SDS-PAGE跑胶这个是缓冲液的问题吗?
bqejjh123
要么胶的浓度有问题,不同浓度的胶适用的分子量大小不太一样,自己查查,要么电泳缓冲液有问题,重新配新的,还有点样量少一些。跑的时间在长点。祝顺利
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问
PCR引物特异性不够好,又没什么好的方法来避免呢?
黑布林的大狸子
看不见电泳图,猜一下情况吧1.如果电泳图上有你想要的条带,直接切取相应条带,做琼脂糖凝胶回收就好了(天根有卖),这个片段只会有你引物的两个结合位点,然后用作模板再扩增就行了。2.如果没有目标条带,可以尝试提高退火温度,也可以考虑换引物ps.如果题主只是想做检测的话,加条探针就好了。
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