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        蛋白条带的问题求助,各种有问题的条带

        相关实验:Western印迹技术检测蛋白质实验

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        只想顺利读博

        图片描述图片描述图片描述图片描述

        各位老师好,这是我的大致实验步骤

        提的蛋白是细胞的总蛋白,我的上样量是10-20ug,电泳时候的电压在130-160V之间;

        转膜是半干转的方法,电流是总膜面积乘以3,时间是36min ;

        封闭用的是碧云天的快速封闭液,4° 2h

        一抗冰箱4°过夜,二抗用的是全式金的兔抗和鼠抗,一抗二抗稀释都是1:1000,用的也是碧云天的抗体稀释液(我的一抗没有猪种属特异性的抗体,所以用的是人或鼠特异性的抗体)

        洗膜是10min,3-4次。

        曝光液1:1配置,2ml,自动曝光。

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        2 个回答

        user-title

        bamboopiggy

        有帮助

        条带都能过去,就说明问题不大,感觉要么是你加抗体的时候,抗体和膜接触不匀,要么就是你转膜的三明治夹子夹的不匀。

        user-title

        喵喵喵柏

        有帮助

        不知道你具体的问题是什么

        第一张图的右下角你应该是有一个气泡,所以条带上面有一个小白点

        如果你的问题是他不是单个的条带,有很多条带的话,需要看一下你的抗体是不是多克隆的

        剩下的几个你可以调整一下,把背景跟条带的对比度调的大一点

        最后两张膜你应该是发光的时候折了一下膜,膜上有折痕就会出现这种印记

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