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        求载体构建的完整步骤和需要注意的事项哇

        相关实验:克隆载体的准备实验

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        dxy_5cdj6ok4

        wx-share
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        3 个回答

        user-title

        dxy_gwrp7ndq

        有帮助

        载体构建的注意事项:

        1.连接反应是 DNA 重组过程中的关键步骤,其成败的重要参数之一就是温度,因此要控制好连接温度。

        2.进行黏末端连接时,会产生一定数量的载体自身环化分子,导致转化菌中过高的假阳性克隆背景。针对这一问题,常采用牛小肠碱性磷酸酶( CIP )去掉载体的5’﹣磷酸以抑制 DNA 片段的自身环化。

        user-title

        府宅

        有帮助

        注意事项

        1.连接产物可短时间在﹣20’℃保存,使用时可以取出进行后续实验;

        2.在细胞转化时,冰浴和热激要严格控制好时间;

        user-title

        bamboopiggy

        有帮助

        分切接转筛,这个最好找本分子克隆,自己慢慢看看,因为每一步都可能出问题,最好先看明白再做。

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