实验问答

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科研学霸天团，48小时有问必答

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问关于核酸斑点显色，我的膜有点小就只有undefined5

bamboopiggy

显色反应可以放皿里，也可以放杂交袋里。膜小，可以放小点的盒里，如果想扩大体积，也可以的。

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问杂交显色的问题，我还有好多问题🙊

bamboopiggy

显色反应可以放皿里，也可以放杂交袋里。膜小，可以放小点的盒里，如果想扩大体积，也可以的。

1 回答295 围观

问求primer premier软件mac版！

dxy_gwrp7ndq

Primer Premier 5 下载链接: https://pan.baidu.com/s/1F5xSVr0NXIb54tAddZh28w 密码: goke

3 回答1364 围观

问如果做污染物对肠分泌GLP-1的影响选择STC-1细胞还是NCI-H716细胞

bamboopiggy

你要有污染物的提取物，这两个细胞都可以，只是一个是人源的，一个是鼠源的，注意抗体的用法。

1 回答318 围观

问如何筛选吸附和钝化重金属菌株？

Topmicro

方法一：菌株活化后接种最适培养基，并加入一定浓度的重金属离子，每隔一段时间取发酵液离心，测定上清液中重金属离子浓度；方法二：采用肠道模拟系统加入重金属离子与菌株共培养，取上清液测定重金属离子浓度；方法三：构建重金属暴露小鼠模型，饲喂菌粉，测定血液及各组织器官中重金属离子浓度，与对照组相比观察其是否降低。

3 回答740 围观

问WB曝光后，膜一片白一片黑而且条带很浅是怎么回事？

bamboopiggy

估计是你的抗体不特异，所以条带浅，然后与黑的地方有非特异性结合。你可以试试增加抗体浓度，看条带会不会黑点。至于非特异性结合，你在确定条带可以以后，提高点洗膜液中tween的浓度就好

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问蟾蜍腓肠肌单收缩的缩短期是多少毫秒？绝对不应期是多少毫秒，两者之间的区别是什么？

bamboopiggy

你把概念弄混了，肌肉收缩是有单收缩和不完全强直收缩和完全强直收缩。单收缩的缩短时间取决于刺激的强度和频率。另外，绝对不应期是心肌独有的特性，在绝对不应期内，给予任何刺激都不会产生动作电位，从而不会引起肌肉收缩。

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问STC-1细胞和NCI-H716细胞哪种更好养活

迟C迟

个人觉得STC-1细胞更好养活，NCI-H716细胞株是悬浮细胞株，少部分会贴壁，贴壁后生长缓慢。

4 回答512 围观

问抗体纯化的方法怎么选择

府宅

固定化金属螯合亲和层析法：配体稳定性高，吸附量大，洗脱条件温和，但同样也更加复杂，因为需要额外的步骤固定金属离子。离子交换层析法：离子交换层析是一种较为常见并被广泛使用的抗体纯化方法。尺寸排阻色谱法：可用于DNA，蛋白质的纯化，缓冲液更改，脱盐等。疏水作用层析法：与蛋白质的作用比较温和，所以能够更好地保持生物大分子的天然结构和生物活性，同时疏水作用也非常擅长从大体积样品中提取低含量的目标蛋白。

3 回答617 围观

问预杂交液的洗膜 65摄氏度洗膜是怎么操作呢

bamboopiggy

你问的是在65度，怎么洗膜吧？你可以把预杂交液预热到65度，然后放入膜，想65度洗，可以讲带温度的摇床调到65度，也可以把普通摇床，塞到65度的孵箱里，办法总比困难多

3 回答543 围观

问核酸斑点杂交，预杂交液和杂交液的制备

bamboopiggy

预杂交液和杂交液在灭过菌的试管里制备就可以。杂交液和预杂交液的区别就是一个加的探针，一个加的鲑鱼精DNA来封闭非特异性的吸附点。预杂交液实际上就是不含探针的杂交液，。用于制备杂交液的预杂交液需要加鲑鱼精DNA，也可以用牛血清。杂交液每100平方厘米 60ul够了，因为预杂交液不可能100%的倒出来，还是有点的。

1 回答1019 围观

问革兰氏染色，细胞能染上色吗

Topmicro

革兰氏染色是通过细菌的细胞壁薄厚不同来实现的，细胞没有细胞壁所以不会呈现紫色。

6 回答1444 围观

问测定酵母中的海藻糖含量，菌体已经收好存于-80摄氏度，拿出来之后可以先解冻了在用细胞破碎以破碎细胞吗？

Topmicro

可以先解冻再破碎，酵母有细胞壁比较皮实，而且解冻之后破碎也更方便。

4 回答343 围观

问WB实验抽提蛋白是用的loading buffer浓度？

whilt-shirt

一般情况都是用5x的，毕竟加到蛋白裂解液里面会稀释loding

5 回答3923 围观

问跑胶的时候选择恒压还是恒流？

未来9

跑胶时要求是恒压,转膜时才是恒流

5 回答2010 围观

问在ncbi上搜索基因序列，为什么给出的氨基酸注释与密码子表不一致呢例如∶GAA ncbi上给出的是F，对应密码子表GAA应为E

bamboopiggy

你给的那个图太小了，我看不清楚，但是你考虑没有考虑过GAA的相对应的反向链是UUC呢？uuc正好就是F。

3 回答594 围观

问石蜡切片在染色过程中出现脱片现象怎么避免？

努力搬砖建设梦想

前面说的都很全面，我补充一点，是我老师说过的，就是在固定包埋的时候要做好。有时候固定没做好，后面切片染色的时候就很容易脱片。用防脱片都不太行

5 回答1939 围观

问同样的样品同样的上样量上了八个，最后条带从左到右颜色大小逐渐降低，不是一样的，为什么

whilt-shirt

有可能是转膜时没夹紧，或者是不是一抗二抗敷育时没放平

6 回答327 围观

问为什么我做出来的是这样呢

喵喵喵柏

除了其他人说的之外，还需要注意这个背景不是很干净，建议优化一下封闭条件，比如室温下延长时间，或者使用牛奶封闭

3 回答375 围观

问实时荧光定量 PCR 实验重复不出来是怎么个情况？

hml04010418

没有具体信息。每次条件的一致包括样本处理的一致。

5 回答3130 围观

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