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        磷酸化蛋白的 WB 检测怎么操作才能避免去磷酸化?

        相关实验:免疫印迹(immunoblotting)

        user-title

        羽2BRD

        样品细胞裂解,就会释放出蛋白酶和磷酸酶,降解或修饰蛋白质,从而影响检测结果。如何避免这种结果?

        wx-share
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        4 个回答

        user-title

        bamboopiggy

        有帮助

        在lysis里加入蛋白酶抑制剂和磷酸酶抑制剂

        user-title

        天一湖医者

        有帮助

        检测磷酸化蛋白时加入磷酸酶抑制剂

        user-title

        dxy_gwrp7ndq

        有帮助

        磷酸化蛋白 WB 时 , 用 TBST 洗时也要注意一下 , 摇床的转速不要太快 , 洗的时间不要太长 , 孵育一抗和二抗之后分别洗 5min 3 次即可 , 宁愿 background 深一些 ,另外,洗的时候,最好不要把几张membrane 叠在一起洗。

        user-title

        府宅

        有帮助

        一定要在 lysis buffer 中加入蛋白酶抑制剂(配方见后页),还要加入一定量的磷酸酶抑制剂,否则即使 band压出来也会很浅,结果也不可信。

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