WB跑不出来内参蛋白怎么办

检查封闭剂浓度是否使用正确，一般3%脱脂奶即可；重新稀释一抗，并降低二抗使用浓度；也可以通过发光Western marker来监控整个wb过程的正确性，如果发光western marker信号同样背景很重，基本判断应该是抗体孵育、洗涤步骤有问题，试剂要逐一排查。

（1）准确估计蛋白浓度，保证10ug以上的上样量；（2）检查转膜海绵垫是否干净

重新稀释一抗，并降低二抗使用浓度；也可以通过发光Western marker来监控整个wb过程的正确性，如果发光western marker信号同样背景很重，基本判断应该是抗体孵育、洗涤步骤有问题，试剂要逐一排查。

看看你是不是用的actin？一般actin的二抗是mouse，你是不是加错二抗了？