实验问答

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科研学霸天团，48小时有问必答

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问求问，我做的ROC曲线联合指标的面积比不上单个指标的面积，啥情况呢？我做的对不对啊，求大佬帮帮我说两句原因，我是个小白

bamboopiggy

如果单纯看你的说法，就是你的联合治疗，不如单药治疗，你首先看你下，你两个单药治疗的ROC曲线下面积是不是都大于0.5，如果都大于0.5，那没有办法了，如果其中一个小于0.5，你可以把这个结果翻转一下，再联合分析。

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问20220412分光光度计培训提问

bamboopiggy

是的，是仪器自动把光程归一化为1cm了。光程归一化为1cm后，则吸光值A为1时，相当于dsDNA浓度约为50ng/μL、或ssDNA浓度约为33ng/μL、或RNA浓度约为40ng/μL。由此，可根据吸光度估算核酸的浓度，这种计算在许多仪器中可自动进行。

1 回答467 围观

问wb条带特别细是什么原因？tlr4 肠蛋白1:1000

dxy_gwrp7ndq

你的问题是没有选对合适浓度的胶，一般使用的胶浓度为6%，8%，10%，12%和15%的胶，而不同浓度的胶对蛋白和指示剂的压缩效果不同，浓度越高，压缩的效果越好，指示剂和显影得到的目的蛋白的条带就越细；而胶的浓度越低，指示剂和蛋白就能跑的越分散，看起来就相对粗一点。

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问双酶切怎么也没切完全，有假阳性怎么办？

bamboopiggy

你先看看你的酶切的接口会不会自连，然后可以做单酶切的对照，是否都可以同时切成线性。

3 回答3004 围观

问荧光定量PCR不制备重组质粒可以做吗？质粒可以

bamboopiggy

可以做啊，只要你有cdna片段就可以，或者是dna片段，也可以。

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问求助6.12.24孔板细胞铺板密度，有大佬能给4倍镜下的照片参考一下吗？

dxy_gwrp7ndq

一般最适浓度为5～10×105细胞/ml。如一般10cm皿的细胞约300-500万个，一些细胞个体小也能达到1000-2000万，可根据所需细胞数目取出部分作稀释或连续稀释后计数。

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问多转录本如何设计引物

bamboopiggy

你先设计引物，然后去跟这些转录本比，最好所有转录本都可以有这段引物，就可以了。

3 回答2106 围观

问CsCl密度梯度离心一定会自从密度梯度吗，配置两个浓度的CsCl用在同一个离心管里会不会互溶？

bamboopiggy

不会的，你加上层的CsCl的时候，帖壁加，应该就没有问题。

1 回答509 围观

问蛋白总是发成这样，为啥呢？

bqejjh123

可能是因为你的丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺的杂质含量太高了

6 回答263 围观

问为什么CO-IP实验后的IgG显影明显？

刹那芳华2333

发生了非特异性结合，可以换一下igG

3 回答1152 围观

问coip的IgG组一定要一点都看不到吗？实验组比IgG组深很多可以吗？

刹那芳华2333

最好是看不到，要不然没有说服力

3 回答281 围观

问大家做coip实验IgG加多少ul啊？应该跟抗体加一样量吗？

天一湖医者

通常上样量为50ug/100ug。

6 回答3689 围观

问平板克隆几天后加药处理

府宅

当培养皿中出现肉眼可见的克隆时,就可以终止培养，弃去上清液,用PBS处理。

4 回答3161 围观

问THP-1悬浮细胞贴壁严重可能是什么原因引起的？

喵喵喵柏

如果没有加入PMA诱导的话，一般是不会贴的确认一下自己培养的细胞是thp-1吗？密度比较大的时候会抱团，但是不会贴壁而且培养的时候，瓶子要立着，不要平放

5 回答2335 围观

问wb条带整个泳道都是黑的

bqejjh123

可能：1.凝胶不均匀冷却，中间冷却不好; 电泳系统温度偏高，这样容易形成混乱一片。2.可能是由于装置不合适，特别可能是凝胶和玻璃挡板底部有气泡，或者两边聚合不完全，也容易混乱。3.样品溶解不好。4.样品中含有不溶性颗粒。5.加样量过多。

8 回答4959 围观

问曝光问题求助，背景很黑条带几乎看不到，是怎么回事呢

喵喵喵柏

请贴一个图片背景黑可以用软件调整，需要区分是多克隆抗体，还是封闭不好，还是没有调整好呢？

5 回答597 围观

问什么叫做汇片，不是很理解，一般不是说的不是细胞的密度吗

dxy_gwrp7ndq

细胞在瓶中增殖时,出现在细胞间的粘连和排列状态,达到某种状态用汇合度%表示,一般达到70%-80%左右可以分瓶

2 回答409 围观

问动物病料病毒分离分离中，如何只保证不含其他野毒感染，只分离目的病毒

bamboopiggy

病毒分离取动物病理组织样品，分别制成100 g／L的组织悬液，加青霉素(100 Iu／mL)、链霉素(100 pg／mL)，4℃ 3000 r／min离心20 min，取上清液接种于Dulac细胞；接种后 6 h用300 mm01／L n葡糖胺(口glucosamine)37℃处理30 min。再培养72—96 h，将增殖病毒的细胞反复冻融3次，收集细胞病毒液。用细胞病毒液再接种细胞，共传代

1 回答682 围观

问请问做荧光多标的时候实验组合不变始终有一个抗体做不出结果，特异性不强，总不在它该在的位置出现，但是这个抗体做免疫组化却能做出来?

啵啵猪

免疫荧光影响因素多，位置不对可能是自发荧光，但免疫组化能出，可能是免疫荧光一抗浓度不合适

4 回答412 围观

问从细胞中提取出的线粒体如何计数？

天一湖医者

不同种类的试剂盒提取的都不同。一般产品包装盒中都附有说明书的。小量质粒提取试剂盒 100-500ng/uL；一般能有300ng/uL

4 回答1582 围观

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