检测到的条带分子质量与预测的不符?有哪几种可能的原因

可能基因有污染

可能是非特异性扩增，引物特异性不高，退火温度不理想都会这样。

1:预测的是否正确？

2:蛋白表达是否携带了其他标签？

3:蛋白是否在和其他物质发生反应，出现剪切或耦联？

4:在样品处理中，蛋白是否充分变性？

5:蛋白纯化技术是否过关？

6:蛋白是否出现降解？

蛋白质有加工修饰，糖基化，乙酰化，磷酸化等等。可能改变蛋白大小。

其次抗体种属与你实验材料种属如果不同也可能有偏差。

还有sds-page胶的浓度如果不合适的话，跑出来的条带位置也有偏差

1.蛋白变性不充分，还是多聚体的形式存在2.存在糖基化位点3.彩虹maker因染料的存在，条带大小有出入

相信看抗体说明书，有的抗体与预测位置差，但是说明书上能看出来

翻译后修饰－比如磷酸化、糖基化等，这些修饰会增加蛋白质的分子量

翻译后剪切－ 比如很多蛋白是以前体蛋白的形式合成的，在执行功能时需要进行剪切成活化的形式，如pro-caspases

不同剪切体 – 有些来源于同一基因的蛋白有不同的剪切方式，每个剪切方式得到的蛋白大小都是不同的

相对电荷（Relative charge） – 氨基酸的组成(charged vs non-charged)

多聚体－如二聚体或三聚体。这些多聚体的形式通常会抵制WB时所做的还原条件，因此造成检测的条带偏大。