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        如何分离到纯的神经元细胞?

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        dxy_csamswa8

        如何分离到纯的大鼠胎鼠神经元细胞?用什么培养基,培养条件?

        wx-share
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        3 个回答

        user-title

        天一湖医者

        有帮助

        实验材料 母鼠

        试剂、试剂盒 BSS

        仪器、耗材 无菌器械显微镜

        实验步骤

        1. 杀死怀孕 18 天母鼠(常用过量 CO2 使其窒息),用无菌器械取出胚胎,放在无菌的培养皿中。

        2. 取下胚胎的头,放在盛有 4 ml 不含 Ca2+ 和 Mg2+ 的平衡盐溶液(BSS)的培养皿中。

        3. 从头颅骨上取下脑,放在 35 mm 培养皿中的 BSS 液滴上,培养皿中半装满 Paraplast(Sigma)。

        4. 在显微镜下剥离脑膜,取下海马体,放在装有 BSS 的 35 mm 培养皿中。

        5. 海马体在新鲜配制的 0.25% 胰酶 BSS 溶液中 37℃ 孵育 15 分钟。

        6. 小心吸掉胰酶溶液,加入 5 ml BSS,层流柜中室温放置 5 分钟。重复此步两次或更多次,后加入 2 ml BSS。

        7. 首先用普通巴斯德吸管分离细胞,然后换用一支用火烧平、内径缩小一半的吸管。

        8. 计数细胞,确定细胞密度。

        9. 所需数目的细胞悬浮于接种培养基中,接种培养皿中 poly-L-lysine 预处理的盖玻片。如果用于生化实验,细胞直接接种 poly-L-lysine 处理的培养皿。

        10. 2~4 小时后,盖玻片转移至含有单层神经胶质的培养皿中,培养皿中是维持培养基。

        11. 每周更换 3 ml 培养液。

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        dxy_gwrp7ndq

        有帮助

        取孕14~16 d的SD大鼠胚胎端脑皮层在条件培养基中培养增殖传代分化,用神经干细胞特异性抗体———巢蛋白(Nestin)鉴定克隆细胞,用特异性的单克隆抗体鉴定克隆球诱导分化后的细胞。

        user-title

        府宅

        有帮助

        分离大鼠胎鼠腹侧中脑组织,加入丝裂原bFGF进行克隆密度培养

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