实验问答

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科研学霸天团，48小时有问必答

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细胞

问关于原代神经细胞培养细胞培养板？

bamboopiggy

将多聚赖氨酸稀释为0.1mg/ml，加入培养皿或将玻片浸入其中，5min，然后60度烘干1h，或室温干燥过夜

3 回答573 围观

问关于原代细胞培养的问题？

心细北方

可能原因：胰蛋白酶消化过度，支原体污染，培养基pH值过碱（NaHCO3分解），细胞老化，接种细胞起始浓度太低或太高解决方法：缩短胰蛋白酶消化时间或降低胰蛋白酶浓度，分离培养物，检测支原体。清洁支架或培养箱。如发现支原体污染，丢弃培养物。使用无菌醋酸溶液调整pH值或充入无菌CO2

6 回答657 围观

问跑WB时如何调节电压？

迟C迟

wb电泳电压电流及时间的选择：300mA90分钟，是1.0的胶厚度，要是0.75也行，但1.5mm的厚胶要时间长一些，另外做的蛋白如果超过100kd建议时间更长一些，若是小蛋白就减少转模时间，立春红确定最适时间。

4 回答10026 围观

问软蜱固定选择哪种固定剂，有无参考文献？

府宅

醛类(特别是戊二醛) 作为初级固定剂。使用戊二醛或戊二醛-多聚甲醛初步固定后再使用四氧化锇后固定的双重化学固定

4 回答523 围观

问请问细胞传代时可以保留少量上清方便细胞适应新环境吗？

Topmicro

保留部分培养上清液可以促进细胞生长，但是我觉得你的主要问题不在这儿，可以更换血清试试。

5 回答494 围观

问各位朋友，请问病毒反转录体系中加入RNA样本的量要怎么确定呢？

bamboopiggy

说明你的rna测得浓度有问题，你先看那你的rna的260/230，260/280 是不是在1.8-2.0之间，如果低于这个数值，说明你测得rna得浓度，比实际浓度要高，你需要改善你提的rna的质量。

4 回答1442 围观

问细胞复苏过程中，离心后混悬，用枪尖比较好还是用一次性巴士滴管比较好？

bamboopiggy

可以用巴氏滴管，只要能把细胞重悬起来，并且重悬的时候，冲击力不太大就好

4 回答422 围观

问检测自噬抑制剂CQ和药物联用对细胞活力的影响

bamboopiggy

如果你要检测的是联合用药，那就不用提前用CQ预处理，因为你加进药物去以后，还有个作用时间啊，但是记得加单药的对照组。

4 回答1578 围观

问PCR引物设计及内参

天一湖医者

引物设计用动物基因好就可以内参也可以用动物源设计

3 回答1303 围观

问原代细胞和普通细胞放在同一培养箱中，会侵染其他细胞吗？

HALOsq

不会，除非你把你的细胞打翻在培养箱，况且，你所得的原代细胞都没有污染，那么怎么会污染其他普通细胞呢？

4 回答2437 围观

问琼脂糖凝胶电泳，制备的胶块在紫外下就像是星星一样，特别亮，请问是什么原因呢？

dxy_gwrp7ndq

基因组污染了，很多RNA停留在孔中或者出孔很慢。

5 回答1056 围观

问PCR实验结果，无内标基因的扩增曲线是与采样操作、核酸提取有关吗？

府宅

内部无扩增但靶序列有扩增有可能是细胞本来就没有此内部基因，也有可能是本身模板就没提出来，然而在PCR过程中被污染，使得靶基因被扩增出来了。

4 回答416 围观

问原核纯化蛋白，IP纯化后的目的带比破碎后的上清的带弱，是什么原因

天一湖医者

是否考虑上样量过小，可增加上样量、降低一抗稀释度并延长曝光时间

2 回答398 围观

问Pull-down对照组也能拉下来条带，是什么原因？

dxy_gwrp7ndq

反应的sample浓度不是越高越好，会造成洗脱困难，造成这样

3 回答660 围观

问酵母双杂交实验过程中，是否需要用到内切酶，有要求吗

迟C迟

构载体的时候可能需要限制性核酸内切酶把目的基因连入目的载体。转入酵母菌之后就按正常的protocol，后面就不需要内切酶啦。

3 回答431 围观

问LC3B的WB实验中，出现LC3B1 LC3B2两个条带，一般是使用LC3B2/1还是LC3B2与housekeeping蛋白比

天一湖医者

如果连内参都出现两条带，且彼此很接近，就要考虑是否是蛋白样本降解了；这是一般考虑使用LC3B2/1。

2 回答2813 围观

问实验小白，拜大神给看下这个免疫沉淀反应到底出没出结果？双向琼扩实验是不是只能定性，不能定量？

dxy_gwrp7ndq

双向琼脂扩散试验常用于定性检测,也可用于半定量检测

3 回答672 围观

问求助：钛片上培养成骨前体细胞想做活死细胞染色，应该用什么显微镜呢？共聚焦显微镜还是正置荧光显微镜呢？

府宅

可以使用正置荧光显微镜观察细胞情况

3 回答487 围观

问图里的酿酒酵母是什么意思啊？求专业人士解答

Topmicro

使用酿酒酵母生产的抗体，你可能还会见到使用各种细胞生产的。

3 回答200 围观

问血凝实验对血凝效价表达方式以log表示时，如，病毒2倍倍比稀释时的HA效价为9log2，怎么理解这里的9log2呢？

Topmicro

病毒2倍倍比稀释时的HA效价为9log2，是用以2为底的负对数(-log2)表示，其效价为1:512。

2 回答8109 围观

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