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问
sashimi plot 图怎么看呢,图里的线线上的数字以及不同的线连接,这些都是啥意思呢,整不明白了
天一湖医者
IncLevel1可被认作是exon inclusion level(ψ),是Exon Inclusion Isoform在总(Exon Inclusion Isoform + Exon Skipping Isoform)所占比例I 是指mapping到exon inclusion isoform上的reads数,对应结果表格中的IC_SAMPLE_1S 是指mapping到exon skippi
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问
药物作用于癌细胞,Bax蛋白表达降低,是否能说明不是通过凋亡而导致细胞死亡?
bamboopiggy
你不能只检测Bax啊,把bcl2还有caspase3检测一下再说,还要加个rescue的实验
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问
核酸斑点杂交杂交真空干燥的,压力有要求吗,为什么我的东西都固定不上
天一湖医者
压力一般没有要求,真空短暂干燥后用50ulTE溶液溶解沉淀。
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问
核酸斑点杂交,倒掉预杂交液后,加入杂交液是只要加进去就行还是要点在点样那一面上
bamboopiggy
最好还是要点在点样那一面,那样接触比较多。
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问
本人做的罗非鱼肾脏原代分离,组织块法,传了两三代之后,瓶壁上出现这种黑色的条纹,一片一片的,请问大家知道这是什么吗?
天一湖医者
有可能是黑胶虫,如果是,可以在镜下看到虫子运动,这样就没必要救了,直接扔。如果是细菌,也能看到运动,另外,培养基会明显变浑,这也没必要救,扔。如果是细胞碎片,那就换液,常规培养,细胞状态好了之后,自然消失。或者是瓶子本身不干净!
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问
流式细胞仪测定细胞活性氧实验
天一湖医者
活性氧检测试剂盒(Reactive oxygen species assay kit)是一种利用荧光探针DCFH-DA进行活性氧检测的试剂盒。DCFH-DA本身没有荧光,可以自由穿过细胞膜,进入细胞内后,可以被细胞内的酯酶水解生成DCFH。而DCFH不能通透细胞膜,从而使探针很容易被装载到细胞内。细胞内的活性氧可以氧化无荧光的DCFH生成有荧光的DCF。检测DCF的荧光就可以知道细胞内活性氧的水平
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问
实验中,料液中固含量高,操作过程中,膜面易产生浓差极化现象,显著降低膜通量,有什么办法可以改善这种情况?
未来9
在膜分别技术应用过程中,产生膜的污染是在所难免的,产生膜的污染的缘由许多,膜污染缘由比较复杂,但究其主要缘由是浓差极化和膜污染。浓差极化是膜表面局部浓度增加引起边界层流体阻力增加,导致传质推动力下降的现象,而膜污染是指料液中的微粒、胶体粒子或溶质分子由于与膜之间存在物理化学作用而在膜表面及膜孔中沉积,使膜孔堵塞或变小,膜阻增大,膜的渗诱率下降的现象。
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问
有老师跑过BCL-2的蛋白吗,我做的缺血再灌注模型,跑了几次,换了两个抗体,但是跑出来的结果是反的,缺氧组比对照组多,不知道是啥
dxy_ewo205k
可以先做定量,看下mRNA水平的表达
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问
蜱虫组织切片一般切多厚?为什么把厚度降低后反而切不出完整的片?
未来9
切取的组织块厚薄要均匀,一般厚度以 0.2 ~ 0.3cm 为适
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问
重叠pcr没有条带,试过不同模板浓度,不同tm值,不同保真酶,怎样才能重叠成功?
微暖
引物设计:第一条片段的反向引物包含第二条片段的25bp左右,第二条片段的正向引物包含第一条片段的25bp,引物长度大概50多bp。分别扩增两条片段。以这两条片段为模板,第一条片段的正向引物和第二条片段的反向引物,pcr扩增就好了。
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问
从细菌中提取酶,用常规的方法总是拿不到我要的蛋白。是不是也可以加点甘油或者PEG来提取?
天一湖医者
常规方法不行的话,加甘油也不一定有作用,可以试试不同ph
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问
从细菌中提取酶,用常规的方法(超声波破壁),总是拿不到我要的蛋白。是不是这种蛋白也是疏岁水性较强,需要加助溶剂才能提取?
天一湖医者
也可以加点甘油或者PEG来提取,但不一定会有作用。
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问
蛋白17kd左右,能跟肝素亲和,现在用聚乙二醇修饰它,分子量增加5000左右,请问修饰后怎么分开修饰的和未修饰的呢?
天一湖医者
可以用凝胶色谱纯化的方法试试。
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问
Sephadex G-25(medium)柱脱盐时,盐浓度太高对柱效有影响吗?若有,一般对盐浓度限度如何?
Hey裴pei
是有影响的。盐浓度较高的样品在柱子上走的峰要更宽,同时需要的柱子的分辨率也高,建议少上点样品,可以减少因浓度导致的影响。
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问
请问有没有合成过配体为FMN的亲和胶?
异乡人hyq
FMN可偶联的有限,FMN的结构上也有个仲胺,可以偶联到带长手臂的环氧活化的填料上。
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问
蛋白质纯化实验过程中,标签包涵体蛋白易洗脱,怎么解决这个问题?
异乡人hyq
原核蛋白表达纯化是很容易形成包涵体的,在现阶段可以采用俩种手段,一是预防,二是复性。预防就是指在蛋白过表达形成包涵体前,对表达环境进行优化的一些手段,来降低重组蛋白合成的速率。例如:密码子优化,表达温的选择,与分子伴侣或折叠酶共表达等等;而蛋白质的复性则是指:在变性条件不剧烈,变性蛋白质内部结构变化不大回时,除去变性因素,在适当条件下变性蛋白质可恢复其答天然构象和生物活性的方法。
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问
标签蛋白易洗脱,怎么查找原因?
天一湖医者
填料有问题,换填料。PH、离子强度是否合适,平衡缓冲液是否应与样品缓冲液 pH、离子强度相同。
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问
蛋白挂在阳离子交换柱上洗脱不下来,怎么办?
天一湖医者
加甘油/蔗糖:增加溶液粘度,降低蛋白之间碰撞几率,从而降低聚合概率 降低孵育时间:减少蛋白和填料的结合时间。
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问
细胞水平要做 Western Blot,一般需要多少量细胞提取的蛋白就够了?
实验菜狗lmd
主要和你的细胞大小,蛋白表达情况有关,细胞比较大,或者蛋白属于微量蛋白,那最好三个孔(6孔板)
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问
为什么进行注射的时候要在小龙虾的第二腹节处注射啊
Topmicro
有利于药物的注射和吸收,其他部位也不容易打进去。
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