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        重叠pcr没有条带,试过不同模板浓度,不同tm值,不同保真酶,怎样才能重叠成功?

        相关实验:多重 PCR 扩增实验

        user-title

        dxy_iv2xuvsw

        用crspr方法敲除目的基因

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        3 个回答

        user-title

        微暖

        有帮助

        引物设计:第一条片段的反向引物包含第二条片段的25bp左右,第二条片段的正向引物包含第一条片段的25bp,引物长度大概50多bp。

        分别扩增两条片段。

        以这两条片段为模板,第一条片段的正向引物和第二条片段的反向引物,pcr扩增就好了。

        user-title

        天一湖医者

        有帮助
        首先怀疑,特异性不好,解决办法:
        1.
        可能是模板量过高,降低模板浓度10-1000倍;
        2.
        适当提高退火温度1-3度,或者先用高于你以往退火温度的1-3度先p上5个循环,再用先前温度p剩余的循环
        user-title

        bamboopiggy

        有帮助

        一开始分别pcr的时候有条带吗?如果这个时候就没有,那下面一步就没必要做了,首先考虑引物设计问题,确定你的引物对

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