实验问答

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科研学霸天团，48小时有问必答

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细胞

问组织蛋白含血量太多了影响后续实验，怎样在裂解组织前应用红细胞裂解液呢？是把组织剪碎后用红细胞裂解液吗？

dxy_gwrp7ndq

新鲜组织经过胶原酶或胰酶等消化处理，通过适当方法分散成细胞悬液，再加入红细胞裂解液

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问GlutaMAX-I是什么？培养细胞如何利用GlutaMAX-I？

bamboopiggy

glumax是glutamine的替代物。GlutaMAX™-I是一种二肽——L-丙氨酰-L-谷氨酰胺——在水溶液中更稳定，不会自发降解。一般如果细胞状态不好，或者是培养基中注明要额外添加glutamine，可以用glutamax

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问各种细胞培养用的dish，flask是否均相同？

bamboopiggy

差不多吧，一般都是底面处理过的，就是有的品牌有假的，需要注意，假的底面处理的不匀

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问细胞不够粘稠影响效果，该怎么解决？

小暮

有时候不够粘稠影响液滴断裂，我看你用的是EDTA，建议细胞消化的时候使用Accutase代替Try psin+EDTA

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问HUAEC细胞和CD4+T细胞共培养培养基的问题

bamboopiggy

这个要看你的实验目的，如果要收HUAEC，就把它放下层，如果收cd4+T，就把cd4放下层。

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问细胞培养时~大家一般提前多久预热？

dxy_g0ob0d88

提前拿出来30分钟足够了，我们有时候也会放室温

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问293 细胞冻存一定要加血清吗？我们根据卖家提供的无血清培养基和冻存步骤进行冻存建库，总是复苏不起来，活不过两代就死翘翘了～

dxy_gwrp7ndq

冻存的细胞状态必须好且处于对数生长期，该用90%血清+10%DMSO，可能会取得好的效果；复苏的温度应在39-40度之间，复苏与冻存正好相反，应该速溶速化。

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问细胞样品抽提RNA的数量问题

Eason老歌迷

用Trizol来提取细胞总RNA的话，一个6孔板的细胞足够了。对于贴壁培养的细胞，可将培养基吸出后直接向培养板中加入Trizol来溶解细胞，然后分次移出细胞裂解物进行后续操作即可。值得注意的是，对于所加Trizol的量，是依据培养板的面积而不是依据细胞的数量来决定用量的（一般每10cm2加1ml）。当Trizol量不足时可导致抽提的RNA中污染有DNA。另外，在Trizol的使用说明中的注意事项提

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问细胞传代后鉴定细胞的稳定

Eason老歌迷

一般情况下细胞生长至完全汇合后就应该传代，所有细胞生长都有一个要求不宜生长过密(也就是常说的长老了)，但有接触抑制的细胞，在汇合前就必须进行传代，这类细胞一般在密度70-80%就进行传代，否则会引起细胞分化。可以5-10代做一次测序。

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问THP1细胞养久了容易抱团或者贴壁，然后还会有一些小黑点，应该怎么样培养？

异乡人hyq

细胞养不好，可能的原因有，THP-1细胞特别依赖细胞浓度，ATCC上10 5到106每ML，是一个很高的密度，细胞少了就不太容易养好。细胞株的来源很重要，如直接来源于ATCC（American Type Culture Collection 美国模式菌种保藏中心）生命力要强于国内细胞库的。注意细胞的密度一定要高，介于5×105—— 106/ML之间，增值的快。细胞数量太少，不适合THP-1生长，一

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问细胞复苏之后，为什么聚团？

异乡人hyq

首先，常规的“抱团”是指贴壁细胞被消化后悬浮状态下的聚集情况。细胞在贴壁生长时，聚集在一起是正常现象。当周围细胞寥寥无几，而这一团已经叠层生长，这就是在悬浮状态就已经聚团的细胞再贴壁导致的。相同条件下，培养的癌细胞对密度依赖性的生长抑制敏感性降低，所以即使在形成单层后，也不会停止生长，而是相互堆积形成多层生长的聚集体。其次，部分细胞被污染后会出现细胞聚团，这和操作有很大关系，比如：传代铺板时，是

4 回答7576 围观

问细胞爬片不均匀，有很多聚集

Eason老歌迷

可能是培养液加的太少。或者细胞接种后震荡的太厉害。

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问Elisa检测细胞培养上清内的细胞因子与血清中细胞因子的检测结果趋势不一致，是怎么回事？血清中细胞因子浓度有差异，上清中没有差异

Eason老歌迷

检测细胞因子的技术大致可分为3类：生物活性检测法、免疫学细胞因子直接定量法、分子杂交检测法。但因分子杂交检测法及生物活性检测法所要求的实验室条件较高，目前多数采用抗原检测的经典方法——ELISA法。ELISA虽操作简单，但一次只能检测一种细胞因子，需要抗原包被，样本需求量大，实验时间大于24小时，且有酶-底物的背景干扰，无法反映细胞因子之间的网络关系。他俩本来就有差别。

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问淋巴结组织分散成单个细胞

异乡人hyq

三种方法，分别是粘附贴壁法、吸附柱过滤法、磁铁吸引法。一、粘附贴壁法我们将单个核细胞悬液倾于玻璃或塑料平皿或扁平小瓶中，37℃温箱静置1h左右，这时候你会发现，“死皮赖脸”的单核细胞和粒细胞均贴于平皿壁上，而未贴壁的细胞几乎为纯淋巴细胞，随后用橡皮刮下贴壁的细胞即为纯单核细胞群。那么此时就达到一个分离的效果。但注意因为B细胞也有贴壁现象，分离的淋巴细胞群中B细胞有所损失。二、吸附柱过滤法同样将单个

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问怎么提取鼠心脏成纤维细胞

异乡人hyq

改良联合酶消化法可以稳定的提取成年小鼠原代心脏成纤维细胞。

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问怎么分离到95%以上纯度的神经元细胞

dxy_btpk2zd7

建议参考https://baijiahao.baidu.com/s?id=1698279024646236112&wfr=spider&for=pc&searchword=%E5%88%86%E7%A6%BB%E5%88%B095%%E4%BB%A5%E4%B8%8A%E7%BA%AF%E5%BA%A6%E7%9A%84%E7%A5%9E%E7%BB%8F%E5%85%83

3 回答369 围观

问请问连翘脂苷A能通过血脑屏障吗？影响化合物药物通过血脑屏障的因素有哪些？如何确定？

异乡人hyq

连翘脂苷A可以通过血脑屏障。脂溶性越高的物质越容易通过，水溶性越强的通过能力差，与血浆蛋白的结合程度越高，通过越不易。可以通过载体转运系统，利用高选择性的载体蛋白，可以使一些难以通过血脑屏障的物质顺利入脑。

3 回答453 围观

问动物流式实验怎么设门？

异乡人hyq

一般根据散射光进行设门，即我们通常所说的前散（forward scatter, FSC）和侧散（side scatter, SSC）来设门。FSC的大小与细胞的直径成正相关，不同的细胞，细胞越大，其FSC越大；反之越小。SSC的大小与细胞内颗粒结构的质量成正相关，不同的细胞，细胞内颗粒结构越复杂，质量越大，其SSC越大；反之越小。

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问加药处理细胞，收集细胞提总蛋白跑WB，漂着的细胞要不要收集？收和不收对结果影响大吗？

米米米小喵

死细胞离心去掉，处理细胞时摸好条件，尽量不要让细胞死的太厉害，细胞增殖受到抑制的组可以少加点裂解液，方便调齐。

4 回答3820 围观

问细胞水平要做WB，多少细胞提的蛋白够做WB？跟细胞类型有关吗？

whilt-shirt

基本上10^6细胞就够了，可以再多一点

5 回答5380 围观

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