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        检测细胞凋亡时,PI染色法的染色剂制备过程是什么,与AO染色法相比有什么优点?

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        郭郭的郭郭

        检测细胞凋亡时,PI染色法的染色剂制备过程是什么,与AO染色法相比有什么优点?

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        3 个回答

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        bamboopiggy

        有帮助

        这两个方法都可以,看你们实验室有那种就用那种呗,一般用PI的多,是因为PI只能染死细胞,正常细胞不能着色

        吖啶橙(Acridine Orange,AO)为一种荧光染料,该染料具有膜通透性,能透过细胞膜,使核DNA和RNA染色。其激发波长为488nm,吸收波长为515nm。它与细胞中DNA和RNA 结合量存在差别,复合物可发出不同颜色的荧光,红色荧光为AO-DNA(F>600nm),绿色荧光为AO-RNA或单链DNA(F>530nm)。
        在荧光显微镜下观察,吖啶橙可透过正常细胞膜,使细胞核呈绿色或黄绿色均匀荧光;而在凋亡细胞中,因染色质固缩或断裂为大小不等的片断,形成凋亡小体。吖啶橙使其染上致密浓染的黄绿色荧光,或黄绿色碎片颗粒;而坏死细胞黄荧光减弱甚至消失。
        Propidium Iodide是一种DNA结合性染料,其激发和发射波长分别为488nm和630nm,产生红色荧光,但无膜通透性,不能透过活细胞膜,只能染死细胞。因此,在荧光显微镜下观察,正常细胞不能着色,早期凋亡细胞呈微弱红光,晚期凋亡细胞红光加强,坏死细胞呈强红色荧光。

        user-title

        天一湖医者

        有帮助

        过程

        制备活细胞悬液106 /ml;

        取95μl细胞悬液,加5μl的AO染液混合、避光作用10min;

        加入5ml PBS,1500r/min离心5min,弃上清,重复洗涤2次;

        重悬细胞,吸一滴滴于玻片上并用盖玻片封片;

        【结果判断】

        在荧光显微镜下,选用515nm激发光镜检:AO染色细胞DNA呈黄色或黄绿色。当细胞凋亡时,染色呈致密浓染的黄绿色荧光或见黄绿色碎片。

        PI染色法和AO染色法也可运用于石蜡切片、冰冻切片及细胞涂片的染色,方法如下:

        常规石蜡切片经脱蜡、水化后(按石蜡切片HE染色的脱蜡方法),用PBS洗5min。

        或冰冻切片经冷丙酮固定15min后,吹干,PBS洗5min。

        或细胞学涂片用4%多聚甲醛固定30min后,PBS洗5min。

        将玻片浸入盛有PI或AO染液的染色缸,室温下避光染色,作用30min。

        PBS洗涤后,用盖玻片封片;

        在荧光显微镜下,选用大于536nm或515nm的激发光观察结果:

        PI染色将凋亡细胞胞核染色呈红色荧光。

        AO染色将凋亡细胞胞核染色呈致密浓染的黄绿色荧光或见黄绿色碎

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        未来9

        有帮助

        PI(碘化丙啶)标记死细胞核酸发红色荧光,根据活死细胞荧光不同直接排除杂质碎片的干扰,弥补了台盼蓝的不足。

        PI无膜通透性,不能透过活细胞膜,只能染死细胞。早期凋亡细胞呈微弱红光,晚期凋亡细胞红光加强,坏死细胞呈强红色荧光。能够更好区分凋亡时期。

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