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问
蛋白条带有点弥散,这种情况怎么解决
bamboopiggy
没事,这样就可以用,条带还是很好的
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问
问一下,机器显影同一张wb膜,加显影液使得显影液铺满膜后需一不需要把膜上多余液体吸干
bamboopiggy
对,要把多余液体吸掉,但是不能吸干,膜要是湿的
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问
临床组织标本冻存已久(半年以上),还能做PCR吗?
天一湖医者
基本上不可能成功了。mRNA都降解完了。要做RT-PCR应该尽量选择新鲜的组织材料,即使保存,也要-80°,而且时间不要太长,最多几天吧。
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问
细胞支原体污染如何治疗与预防
Eason老歌迷
如何避免支原体污染:首先肯定是要做好细胞间消毒,确保操作时没有污染,做到正确操作,确保你的细胞培养操作器械无菌,可以在培养基中加入适量抗生素。出现支原体污染该如何应对:对于非重要的细胞,如培养中的细胞、WCB的细胞等,将培养物与用过的培养基灭活后丢弃即可。比较重要的细胞,用清洗纯化法清除支原体污染。
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问
在对细胞进行梯度给药给药时,母液是用水配的,浓度过低,那么在用培养基稀释药物时,细胞最低能接受稀释多少倍才能保证渗透压不受影响?
Eason老歌迷
这个要自己先算好浓度,稀释时可以用培养基,加多少量自己一定要算好。绝大多数细胞对渗透压有一定耐受性。就拿人的来说吧,人的血浆渗透压约为290mOsm/kg, 可视为培养人体细胞的理想渗透压。而对比来看,鼠细胞渗透压则是在320mOsm/kg左右。对于大多数哺乳动物细胞,渗透压在260-320mOsm/kg的范围都适宜。
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问
细胞培养过程中,细胞周围包括细胞上有很多小黑点,怎么办?
Eason老歌迷
看到有小黑点,可以这样做:先要用肉眼去观察培养基是不是混浊。然后在镜下观察培养细胞生长的状态,黑点是不是能游动。如果细胞被污染,微生物则会大量繁殖,培养基就会迅速变黄、变混浊。污染包括细菌污染、支原体污染等。培养原代细胞中出现小黑点,可能是原代组织中的杂质,多次传代可以消除。
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问
病料存放旧后测rna数值偏差大是操作不当还是污染可能性大?
迟C迟
样品放久了测OD不准,可能是RNA已经降解了,测出来估计是污染了。
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问
HEK293细胞或CHO-K1细胞在摇瓶培养
Eason老歌迷
第一,换液时动作要轻。第二,293细胞在低代时容易贴壁,生长良好,在传到几十代以后,易聚集成团,且贴壁不牢,用PBS冲洗时即可能脱落,即使消化后也不容易吹打成单细胞悬液。第三,刚复苏的293贴壁很慢,复苏接种后24小时内,应尽量减少观察细胞次数或不作观察,以免因晃动而影响细胞贴壁。复苏后48小时左右观察贴壁情况并进行首次更换培养基比较合适。
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问
请问养细胞过程中受到真菌污染该怎么处理?
迟C迟
CO2孵箱被真菌污染后,可把所有细胞暂时转移,采用无气味杀孢子剂擦洗孵箱(包括隔板,箱壁)。并把杀孢子剂喷洒成雾状,使其蒸汽弥漫。待杀孢子剂的气雾消散后,再移入细胞。孵箱应定期清洁(2月左右),尤其在多雨的季节。其它培养箱清洗方法是:用84液擦洗-清水擦洗-75%酒精擦洗-紫外灯照。预防真菌污染,可在培养基里加3u/ml的两性霉素或制真菌素或放线菌素D或双抗;但细胞一旦污染,很难挽救,制真菌素或放
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问
猪肺原代肺巨噬细胞生长速度比较慢,贴壁效果不好怎么办
Eason老歌迷
细胞生长速度慢的解决办法:增加起始培养细胞浓度;换入新鲜配制培养液;补加生长因子;血清需要保存在5℃到20℃,培养液需在2-8℃避光保存;含血清培养液在2-8℃保存,并在2周内用完;要轻轻吹打消化细胞;分离培养物,检测支原体;比较新培养液与原培养液成分,让细胞逐渐适应新培养液。细胞不贴壁:细胞的传代最重要的是胰酶处理时间:消化不够细胞本身就是成团的;若胰酶处理太久,容易造成细胞膜蛋白损伤,使细胞贴
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问
质粒过表达,CMV启动子转录起始位点是什么?细胞内转录出的mRNA有5'UTR吗?
天一湖医者
启动子一般位于转录起始位点的上游。启动子位于结构基因5'端上游的DNA序列,能活化RNA聚合酶,使之与模板DNA准确的结合并具有转录起始的特异性。
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问
人心肌细胞系都有哪些?怎么选择 人的心肌细胞怎么分离
天一湖医者
一类是普通的心肌细胞,包括心房肌和心室肌,含有丰富的肌原纤维,执行收缩功能,故又称为工作细胞。另一类是一些特殊分化了的心肌细胞,组成心脏的特殊传导系统;其中主要包括P细胞和浦肯野细胞,它们除了具有兴奋性和传导性之外,还具有自动产生节律性、兴奋的能力,故称为自律细胞,
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问
Tunel凋亡和双染测凋亡有什么本质差别吗?
Eason老歌迷
双染法特异性高,简单易行。tunel灵敏度高,但是成本高。最好是配合着用
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问
iPS细胞在复苏培养的过程中容易遇到的问题有哪些?
天一湖医者
培养细胞不贴壁? 悬浮细胞成簇?原代细胞培养物污染?培养细胞死亡等问题。
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问
最近好几次Western blot出来的结果不满意,怎么办呢?
丁冉1234
有可能是曝光液时间久了失效或是条带上沾了太多的曝光液
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问
求助,如何判断细胞的对数生长期
天一湖医者
判断细胞是否处于对数生长期的方法:1. 细胞汇合度达到70%-80%时基本上是出于对数期,在显微镜下一观察就可以 。 2. 做生长曲线一作图。3. 细胞计数,养上几个孔的细胞,每隔1-2天消化一个孔的细胞下来用台盼蓝染色血球计数板计数。4. 如果是简单的判断一下,要搞清楚细胞生长的不同时期,刚开始细胞生长一般是悬浮的,后来贴壁生长,直到生长到长满瓶底80%时间都是对数期。细胞的对数生长期:对数
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问
细胞提取rna跑胶条带太暗,还有弥散条带怎么办
Eason老歌迷
扩增杂带?解决办法:退火温度提高,延伸时间缩短,混合样品时放冰上,尽量别对着样品说话,以免污染样品。
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问
外周血淋巴细胞染色体实验中,分裂相极少的原因?
bamboopiggy
不是试剂的问题,就是淋巴细胞收集的问题,淋巴细胞的量要够
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问
关于细胞传代培养的细胞问题?
墨尔本
如果有仪器和试剂的话其实用AOPI进行染色会更直观,死的是红色,活的是绿色。
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问
请问碱性尿素缓冲液如何配制,PH值应该为多少?
bamboopiggy
先配缓冲液:8.95g磷酸氢二钠,3.4g磷酸二氢钾溶于水,并定容至1000ml,然后再加入30g尿素,因为尿素缓冲液pH值为6.83.可以加NaOH调至7.0
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