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实验问答

28,511,623 科研人在看

问为啥我的内皮细胞长的好慢呢？培养基用内皮细胞专用培养基，还把血清加到了百分之十，可都十天了还是不能传代。

未来9

内皮细胞长的很慢的原因可能有：传代的细胞密度太小；换液间隔时间长；查看是否有污染；细胞消化过度。

3 回答535 围观

问细胞加药或者换液后突然全部死亡，都裂解掉了，换液前贴壁贴的挺好的，试过别的细胞系，换过孔板，也有出现这种状况，这是为什么呢？

Keven轩

可能是你加胰酶的量过多或者浓度过大，细胞消化过度，而且吹打混匀过多导致细胞裂解。而且下次加药的时候可以从培养皿边缘加药，且不要用力将液体大下

4 回答2456 围观

问细胞培养过程中，发现贴壁细胞表面沾了很多死细胞，传代过程中一直存在怎么破？

bamboopiggy

胰酶消化一下细胞，然后等细胞贴壁后。尽早换液。一般你说的这种是细胞扎堆生长，顶上的细胞容易死

4 回答581 围观

问细胞培养中细胞逐渐死亡？状态变差

Miracle星

我们把这种称为黑胶虫及其分解复合物，是一种常见的细胞污染物。请与细胞共生，髓细胞传代而传代，通常抗生素对其无效黑胶，虫与细胞竞争性生长，对细胞生长不利，严重时导致细胞死亡，目前很多细胞存在被细菌传染污染的现象，对细胞培养及其后续实验造成影响。如果小黑点有增值的趋势，有可能是污染了，需要处理，如果小黑点没有增值趋势且不影响细胞生长，也不影响实验的话，可能是黑胶虫。也有可能是细胞碎片或血清里的沉淀析出

6 回答1166 围观

问请问形成包涵体的融合蛋白，能使用包涵体裂解液之后，用Glutathione Sepharose 4B亲和层析吗？

天一湖医者

使用包涵体裂解液之后，最好选择Glutathione Sepharose这样载量更高,流速更快.

1 回答512 围观

问第一天Pma诱导，第二天换液时观察少数没贴壁大部分是贴壁了，第三天要做实验发现贴下去的有一半都脱落了贴壁只剩一半感觉也是

Miracle星

操作时要避光操作如果你手上这只已经传带很多的话，建议换一只新的，这是直接的方法。检查培养基是否有污染。在传代或复苏前选用包被也包被培养瓶。增加细胞贴壁性。

3 回答469 围观

问取小鼠肿瘤组织制备单细胞悬液进行细胞比例测定，必须用新鲜组织吗，能不能用存放的组织？

天一湖医者

细胞比例测定建议最好用新鲜组织。

3 回答528 围观

问可以用S/P20细胞注射小鼠，待小鼠长瘤子之后去瘤细胞吗？如何可以，请问是皮下注射还是腹腔注射？如何去取这个瘤细胞呢？

天一湖医者

可以用S/P20细胞注射小鼠，待小鼠长瘤子之后去瘤细胞。可以选择皮下注射。

2 回答642 围观

问请问大家常用于亚细胞定位做内质网标记都有哪些？

bamboopiggy

ER-Tracker™ Green (BODIPY® FL Glibenclamide)，或者用ERp72 ，PDI 抗体都可以

2 回答1065 围观

问我想知道这个图怎么分析啊！有大佬嘛！

天一湖医者

构建一个将靶启动子的特定片段插入到荧光素酶表达序列前方的报告基因质粒，如 pGL3-basic 等。将要检测的转录因子表达质粒与报告基因质粒共转染HEK293T细胞或其它相关的细胞系。如果此转录因子能够激活靶启动子，则荧光素酶基因就会表达，荧光素酶的表达量与转录因子的作用强度成正比。加入特定的荧光素酶底物，荧光素酶与底物反应，产生荧光，通过检测荧光的强度可以测定荧光素酶的活性，从而判断转录因子是

2 回答627 围观

问提取细胞RNA时，不小心将trizol试剂打翻洒在了超净工作台上，该如何处理呢

Miracle星

打翻化学试剂或器皿处理的情况不同，大致来说，1瓶中为挥发性有毒或者是有害试剂，立即打开通风设备，疏散试验人员，第2种瓶中为腐蚀性液体时立即清理掉，此处清理应根据具体情况使用物理或化学方法，比如如果有是装有汞的器皿被打破，汞珠散落在地应撒上硫粉处理。第3天中午是几或者是几无毒无害，则应把打翻的事迹清理进废液缸内，再把碎玻璃渣扫掉就差不多可以了。

5 回答3171 围观

问为啥我做的胶有这个东西，是玻璃漏胶吗？

Miracle星

1）每次电泳完后，洗净玻璃、胶条和其它附件，下次用之前，用75％酒精擦拭玻璃和胶条，能有效防漏，且利于剥胶。 2）避免玻璃边缘（与胶条接触处）破损很重要，尤其是下面和胶条接触的地方 3）关键是找一块很平的桌面，使两块玻璃底面非常齐就行了 4）胶条一定要干，跑完电泳后，胶条就放在实验台上晾着。 5）下面的胶条注意不要老化，如果有裂纹的话用保鲜膜垫在上面，也可以有效防止漏胶，或者反过来用。 6）玻璃在

3 回答570 围观

问大家分离神经原代细胞用的消化液和方法是怎样的

Miracle星

培养基选择无血清培养基被认为是最标准最好的培养基，需要的添加剂为B27和谷氨酰胺培养出的细胞状态，均一，胶质细胞几乎不分裂，其中neurobasal是鼠培养级而-a为新生鼠培养基。切忌中途换培养基，要从一而终。

3 回答771 围观

问WB做的表面蛋白，总是有两条条带

Miracle星

估计跟常温放置有关系，要是多余的那个条带比你的目的蛋白条带小的话，那么可能就是目的蛋白降解了，你可以重新电转再杂交试试。电转后的膜最好要4℃保存。而且，你也可以查查目的蛋白的相关资料，看这个蛋白是不是有不同的多聚体形式，也有可能是这种情况导致的。

3 回答1058 围观

问干细胞CFU计数问题

bamboopiggy

造血干细胞的集落形成检测：1)将所需要的MethoCult®培养基在2-8℃过夜或室温融化。(2)用16 号钝针头的注射器将培养基分装于流式管中（3.3ml/管）(3)准备三个35 mm的培养皿，制备双份培养系统。具体方法如下：把两个35mm的带盖培养皿和一个盛有水的35mm无盖培养皿一起放置到100 mm的培养皿中。(4)准备CD34 细胞，细胞计数仪计数后用0.3mlIMDM 2%FBS稀释细

2 回答1095 围观

问做蛋白与蛋白免疫共沉淀时，前提必须得是使用高表达目的蛋白和诱饵蛋白的细胞株嘛？

Miracle星

免疫共沉淀既可以用于检验已知的两个蛋白质在体内的相互作用，也可以找出未知的蛋白质相互作用，不管是两者的哪个，其原则都是一样的，都需要用特异性的抗体与其中的一种蛋白质结合，之后通过蛋白质A或蛋白质G-琼脂糖微珠将复合物沉淀下来，然后用SDS-PAGE鉴定。免疫共沉淀中设置正确的对照非常重要，因为该方法可能出现假阳性的概率比较高，设置的对照包括：在对照组中使用对照抗体，以缺失目的蛋白的细胞系作为阴性

2 回答553 围观

问请问跑出这样的条带是怎么回事？

Keven轩

有些不太整齐，应该是配胶没有均匀吧

3 回答286 围观

问电源时有时溴酚蓝晕染特别厉害，都快超过1cm了，有时却很细，这是为什么？成分没换过。

Miracle星

我觉得是不均匀,重新配一下,换下缓冲液电泳缓冲液的问题：因为我以前跑双向的时候也遇到过此现象，后来换用新鲜的电泳缓冲液后溴酚兰就跑得成一条细细的直线了，原理不太清楚。2、分离胶内浓度不均：灌胶的时候胶要混匀，否则胶内浓度不均也会有此现象。3、分离胶凝固不均一：如玻板没洗干净，玻板在灌胶前用吹风吹干时没冷却至室温就灌胶，造成玻板内外温差等。不知正确与否，请大家多讨论。

3 回答444 围观

问植物外泌体或者细胞外囊泡如何提取蛋白质

bamboopiggy

建议你直接买个外泌体蛋白提取的试剂盒吧，都做到这么个份上了，不怕花钱补充一下：thermo有个kit，可以直接提取外泌体得RNA和蛋白质，说明如下：总外泌体 RNA 和蛋白分离试剂盒设计用于从预分离的或富集外泌体中分离 RNA 和蛋白（未提供）。其适用于 RNA 表达（具体为 miRNA）、处理或功能研究。该试剂盒能够回收相同纯化外泌体制备物中的 RNA 和蛋白。其中一部分样品经过有机提取，然后在

3 回答1909 围观

问各位大神救命！帮我看看这是什么污染？应该如何防治？

bamboopiggy

感觉你还是重新提吧，这个是细胞间常见的真菌污染，感觉很难清除掉。再提的时候，注意无菌操作

3 回答1314 围观

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