实验问答

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科研学霸天团，48小时有问必答

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细胞

问细胞离心下来的离心速率应为多少?

Eason老歌迷

离心速率一般为300×g(约1000rpm)，以重力加速度g(980;s2)的倍数来表示单位。5 到10 分钟即可，转速过快，时间过长都将造成细胞死亡。

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问流式细胞术如何进行荧光补偿？

天一湖医者

使用标准微珠确保细胞仪的性能符合规格。利用未染色的样品设置荧光通道电压。调节前向和侧向散射光，以便清楚界定细胞群。在后续分析中，死细胞、细胞团以及细胞碎片应被排除。应尽可能避免使用发射光谱重叠程度较高的某些荧光染料组合（例如，APC 和 PE-Cy5）。各荧光染料都需要补偿对照，并且应包含阳性和阴性细胞群。设置补偿时应单独使用补偿对照。阳性细胞群的亮度应至少与实验中包含的其他细胞的亮度相当，并

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问非细胞提取物做wb如何选取内参

天一湖医者

样本的种属来源不同，内参的选择也是不一样的。哺乳动物的样本需要选择哺乳动物中稳定表达的蛋白作为内参；同样的，植物样本需要选择植物中稳定表达的蛋白做内参；

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问冻存细胞复苏解冻时间问题？

zeemee

37度水浴1-3分钟就可以，千万不要温度太高

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问WB实验中，电转时出现条带弥散是怎么回事？

天一湖医者

可能是电场不均匀，尝试换转膜设备和缓冲液。

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问对于难贴壁的心肌细胞，用多聚赖氨酸包被培养皿可以吗？我们一直用的是鼠尾胶原。

bamboopiggy

鼠尾胶原和多聚赖氨酸都可以，直接有促贴壁的作用就行。

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问凯氏定氮法怎么去除掉非蛋白质氮？

天一湖医者

硫酸铜在碱性溶液中，可将蛋白质沉淀，且不溶于热水，过滤和洗涤后，可将纯蛋白质和非蛋白质含氮物分离，再用凯氏定氮法测定沉淀中的蛋白质含量。二、仪器设备（1）烧杯：200mL。（2）定性滤纸。（3）其它设备与粗蛋白质测定性相同。三、试剂及配制（1） 100g/L硫酸铜溶液：分析纯硫酸铜（CuSO4 5H2O）10g溶于100mL水中。（2） 25g/L氢氧化钠溶液：将2.5g分析纯氢氧

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问一般拿到细胞后，应该注意什么?

Eason老歌迷

拿到细胞以后呢，就先不要开盖，放在培养箱里放一段时间，在显微镜下观察细胞生长情况，并对细胞拍照，观察培养基的颜色，有没有漏液情况，细胞有没有污染。

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问请问APP/PS1小鼠最大能活到什么时候？可以帮忙提供一下文献名称或出处

bamboopiggy

我查到的文献是 24个月。Comprehensive behavioral characterization of an APP/PS-1 double knock-in mouse model of Alzheimer's disease

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问THP-1细胞复苏困难如何解决？

Eason老歌迷

大概有几个原因，你可以看看是不是你的冻存液加太多了，或者是冻存的量太大了，或者是存在细胞污染，等等

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问请问这是细胞污染么？

Eason老歌迷

首先细胞污染主要是细菌污染，霉菌污染，支原体污染，黑胶虫污染，病毒污染，交叉污染等。一般啊细菌污染，它在显微镜高倍镜下多可见，根据其种类不同，有不同的外形，培养基呢会变浑浊、变黄较快，观察会很明显。你这个虽然没有明显的细胞污染，但是能看到一条黑粗线，是不是操作时误染上去的

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问纤维素、半纤维素和木质素之间有没有什么含量关系？

天一湖医者

　　没有什么关系。纤维素（cellulose）是由葡萄糖组成的大分子多糖。不溶于水及一般有机溶剂。是植物细胞壁的主要成分。纤维素是自然界中分布最广、含量最多的一种多糖，占植物界碳含量的50%以上。棉花的纤维素含量接近100%，为天然的最纯纤维素来源。一般木材中，纤维素占40～50%，还有10～30%的半纤维素和20～30%的木质素。　　半纤维素(hemicellulose)：是由几种不同类型的单糖

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问什么是 MPF 对细胞周期调控？

Eason老歌迷

举几个例子，比如说对转录因子抑制物的磷酸化，对核纤层蛋白磷酸化，对H1组蛋白的磷酸化等。定义就是它通过使某些蛋白质磷酸化，从而改变其下游的蛋白质的结构和功能，来实现其调控细胞周期的目的。

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问在同种质粒上插入不同基因，比较这些基因的表达量，质粒转染时按等质量算，还是按等拷贝数算呢？

bamboopiggy

因为你要比较的不同基因的表达量，所以要在同一个级别比较，需要按照拷贝数来计算，不能按照质量算了

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问请问用一段时间的细胞，怎么检测细胞有没有感染其他组织？有什么试剂盒或者检测方法吗？

n0y0j7

感染其他组织？我觉得实验室同时有几种长的快的癌细胞，会不会某个瓶里两种细胞都有？会相互克制少的被灭了，还是形态各异很好区分能看出来，种属一样的话检测估计不好检测。

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问细胞没有污染，血清浓度为20%，DMEM高糖培养基，但是细胞长的状态不好的原因？细胞没有过度消化

Eason老歌迷

更换不同的培养基或者血清看看，是不是细胞培养基的有些营养成分少了。

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问请问大家配好的培养基在4℃最多能放多久？如果在60℃水浴了一下午，培养基还能用吗？

未来9

密封灭菌后放置在2-8℃冰箱内可以保存三个月，普通的培养基平板可以保存一个月或更久。60℃水浴了一下午，培养基还可以用的。

3 回答6065 围观

问细胞培养基里出现小黑点，但是溶液没有变浑浊，怎么去除呢？

Eason老歌迷

可以做一下支原体检测，如果排除了支原体污染，可以看看是不是细胞老化，或者黑胶虫污染

3 回答415 围观

问L－谷氨酰胺在细胞培养中重要吗？它在溶液中不稳定吗？

Eason老歌迷

肯定重要，它不仅可以提供能量，而且蛋白质的合成和核酸代谢的也有它的参与。至于说它稳不稳定，其实它并不是一种稳定的氨基酸，在中性水溶液中会自发降解，4℃冰箱内放置2周,大部分谷氨酰胺就没了。

4 回答1119 围观

问请问原代小胶质细胞的提取是只能从乳鼠的大脑提取嘛？成年鼠的大脑可以吗，还是成年鼠的脊髓？

Eason老歌迷

一般是从乳鼠的大脑皮层提取。当然可以从成年鼠的大脑中提取，你一查文献就能看到，介绍了很多种方法，比如说Calvo, Belen在IBRO Rep 2020 Jun对解离方法和基于Percoll的分离进行比较过分析。

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