实验问答

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科研学霸天团，48小时有问必答

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问培养的原代卵巢颗粒细胞支原体污染如何判断？

bamboopiggy

400X看不到支原体的，检测支原体最简单的方法就是取培养液，直接进行pcr检测。

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问如何制作简易的小鼠代谢笼

天一湖医者

这个比较详细，参考一下http://www.xjishu.com/zhuanli/01/201821722968.html

1 回答1216 围观

问请问如何确定药物作用于细胞的靶蛋白是什么？脂溶性很差的药物能通过细胞膜吗？

天一湖医者

.高通量筛选的方法用微量滴定之类的方法,看分子能否与已知的蛋白质结合。一般只做计算机算出来的特定蛋白质

1 回答246 围观

问可否使用与原先不同的培养基?

以水为师ISD8

可以的，但是不能一下子更换条件。要循循渐进，比如将两种培养基混合，不断换液，不断加大新换培养基的比例，就能更换称新培养条件。

6 回答388 围观

问为啥我36kd出来的不好，而15kd出来的就好很多呢

bamboopiggy

不同的抗体，杂出来的条带形状会不一样，可能你15kd的抗体好

1 回答252 围观

问细胞出现杆状污染，部分杆状聚集成团，这是啥原因导致的？

Guoood

细胞出现细菌污染，镜下可见杆状细菌在游动，如果不会游动而且培养基清亮则不是污染。杆状成团是因为细胞太密，铺细胞时没有吹打散。

3 回答593 围观

问AC16细胞在换T75瓶后，细胞状态很差，培养基没有变，这是啥原因？

Guoood

大概率是传代的时候消化过了，细胞状态变差。建议稀释胰酶，消化时镜下观察细胞变圆即可终止消化。

3 回答263 围观

问细胞生长逐渐变慢是什么原因?

Guoood

细胞密度太低。传代时注意细胞密度不能太稀细胞代龄很高了，也就是细胞老了，随着代数增多，逐渐长的慢传代消化不能太久，容易损伤细胞，建议稀释胰酶，摸索合适时间

4 回答661 围观

问如何判断悬浮细胞状态？

bamboopiggy

悬浮细胞状态好的话，单个细胞呈球形，透亮，没有贴壁，没有变形

4 回答4793 围观

问H9c2细胞培养昨天传代，今天发现有团块，还有一瓶有条黑线，这是污染了，还是有细胞团块呢？

bamboopiggy

黑线基本是掉进去的纤维，hepG2本来就容易聚团，你消化的时候，没有消化开

3 回答766 围观

问细胞没有及时换液，传代，出现的团块是不是细胞污染

Eason老歌迷

出现这种情况，你需要大概的判断一下，把培养瓶或培养皿拿起来，对着光线检查，用肉眼看一看，是不是混浊，培养基有没有颜色变化。还可以拿显微镜观察一下，在高倍镜下可以观察到细菌，它们可能是棒状或球状，单独成链或成团存在，它们也可能和细胞混在一起。有可能已经发生了细胞污染，也有可能是操作不当引起的。

3 回答936 围观

问RAW264.7细胞怎么避免过度分化？

浅陌NPKT

1.传代时密度稀一点20%-50%2.传代勤快一点，基本每天都传代，密度达到70%以上就要传了3.血清一定要好的，比如乌拉圭，Gibco的血清4.传代时，胰酶消化时间短一点，只要半贴壁的细胞，贴壁分化的细胞不要，操作轻柔一点，不要刺激到细胞

4 回答1296 围观

问 细胞传两代后开始逐渐死亡的原因？

Guoood

传代不能过于频繁。建议等细胞长90%以上再进行传代，否则频繁消化细胞可能会损伤，可适当降低胰酶浓度，比如用灭菌PBS将胰酶稀释一半后使用。还有一种可能就是由于冻存细胞方式不对，复苏细胞质量比较差，不能很好的贴壁，可重新复苏一管好的细胞再试试！

4 回答1414 围观

问请问小鼠AWR测定的球囊如何制作

bamboopiggy

自制结直肠扩张球囊 (简称球囊)：一次性保鲜袋用塑封机制成长2 cm，直径0.8 cm，一端封闭的圆柱形球囊，输液导管插入球囊中，导管与开口端用丝线结扎，确保密封不漏气。测量时将球囊插入小鼠肛门，深度为球囊结扎线距肛门括约肌大约0.5 cm处，用胶带轻轻将外端导管固定在小鼠尾巴上，以防球囊在实验过程中滑出。导管通过三通管一端与血压计相连，一端连接注射器。小鼠在实验前12 h禁食不禁水。将小鼠放置在

2 回答987 围观

问为什么我跑出来的蛋白很圆?

天一湖医者

可能上样量没点好，PAGE胶凝的时间短。

2 回答333 围观

问请问怎么研究药物作用于细胞的方式是通过膜表面受体发挥作用还是进入细胞里面的呢？

bamboopiggy

你可不可以在你的药物上加上一个示踪的蛋白，然后confocal照一下就可以。

1 回答450 围观

问跑wb,目的蛋白是p-p65，为何40附近的那条带明显

天一湖医者

原因：一抗非特异性与蛋白结合。解决办法：更换一抗。

2 回答753 围观

问细胞传代过程中的问题？

Eason老歌迷

第一个问题:也有可能是支原体污染，或者是培养基pH值过碱化，或者是你没有掌握好传代的时机，细胞老化了；还有就是可能接种细胞起始浓度太低了。第二个问题:首先你打错字了，你想表达的可能是抱团生长是吧。抱团生长有很多原因啊。细胞离心速度过大或时间太长。你消化不完全的时候，细胞和细胞之间的连接没有分开。你的细胞老化了。或者是你传代的时候没有吹打均匀，细胞团过多等等

4 回答804 围观

问脑细胞提取，如何避免污染

天一湖医者

1、从培养箱取放细胞前，用酒精清洁双手（或手套），尽量缩短开门时间和减少开门次数。培养瓶放入培养箱前，用酒精消毒表面，并稍等至酒精挥发后再放入，以免培养箱内滞留过多乙醇蒸气。2、操作的时候防护服、口罩、手套缺一不可。操作前，准备好所有实验所需物品，以减少走动，物品需有序摆放在超净台触手可及的地方，同时空留足够操作空间。3、操作时，试剂不用尽量及时盖上盖子，移至操作区外围，尽量不要从开口容器上经过。

3 回答377 围观

问贴壁细胞长满了不换瓶会怎样?

沙砾FLY

在动物细胞培养时，用培养瓶培养细胞就有贴壁生长，接触抑制的特点，如果细胞贴壁生长长满整个瓶身，以后细胞将不会再增殖，也不会出现长两层细胞的现象，这个时候就需要更换培养瓶和培养液，否则细胞将停止增殖。癌变的细胞就不会受到这一性质的限制。癌变的细胞贴壁生长长满瓶壁出现接触以后并不会出现抑制现象，还可以无限增殖。意思说，细胞可以长出两层，三层甚至更多层，无限增殖下去，最后就会出现一个肿瘤类的细胞团，一团

6 回答2429 围观

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