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实验问答

28,513,021 科研人在看

问求活菌计数方法，在不借助仪器的情况下？

bamboopiggy

你是说活菌克隆的计数方法吧？不是单个菌的计数方法，你可以直接用笔在平板上点点来计数。

3 回答730 围观

问要做乳酸菌膜蛋白差异分析，可是用了贝博的膜蛋白提取试剂盒感觉效果不好，问一下提膜蛋白的师兄师姐们，有没有好的提取膜蛋白的方法，谢

bamboopiggy

根据你的实验目的，你选一个要用的试剂盒吧，虽然我不能提公司的名字（要不就说我打广告），但是你应该可以搜到。对于这些比较细的实验，建议不要买国产的试剂盒，虽然便宜，但是做不出好结果。

2 回答804 围观

问糖蛋白都有哪些呀？有没有纯糖蛋白

bamboopiggy

糖蛋白是一种含有寡糖链的蛋白质，两者之间以共价键相连。其中的寡糖链通常是经由共转译修饰或是后转译修饰过程中的糖基化作用而连结在蛋白质上。糖蛋白多肽链常携带许多短的杂糖链。它们通常包括N-乙酰己糠胺和己糖（常是半乳糖或甘露糖，而葡萄糖较少）。我感觉你可能没有理解你导师的一声，最好去和你导师double check一下，你导师可能想让你表达一个蛋白，但是有糖基化修饰

3 回答746 围观

问请问各位大神们，小白第一次做肠道组织免疫组化，重复师姐摸索的浓度，DAB染色30秒组织全部都变棕色，背景也很深，是抗体非特异吗？

bamboopiggy

没法放大看，但是但看这个图，感觉染的挺好的啊，你的蛋白在肠绒毛上皮细胞表达丰度非常高

3 回答823 围观

问请问这是什么原因造成的呀，好多杂带

天一湖医者

1）目的蛋白有多个修饰位点，本身可以呈现多条带，建议查阅文献或进行生物信息学分析，获得蛋白序列的修饰位点信息，通过去修饰确定蛋白实际大小2) 样本处理过程中目的蛋白发生降解,建议加入蛋白酶抑制剂；样本处理时在冰上操作3）杂蛋白多，建议处理目的蛋白4）抗体特异性不强，建议使用特异性强的抗体5）抗体孵育时间过久，建议减少抗体孵育时间6）二抗与抗原有交叉反应，建议选择合适的封闭物7）二聚体或多聚体存在，

3 回答318 围观

问wb实验制胶为什么老有气泡呢？如图气泡感觉是在胶和玻璃板之间（板子认真洗干净并且烘干了，图片脏是板子后边的架子）请各位帮帮忙。

bamboopiggy

如果确定玻璃板洗干净了，那就是玻璃板不平，你别用这块了，换一块。

3 回答967 围观

问目的蛋白趋势是什么意思？什么是内参齐？

bamboopiggy

目的蛋白的趋势，比如说你的对照组比你的实验组的蛋白表达量少50%，但是你每次做wb，不可能是做的结果一摸一样，可能这次少50%，下次少40%，只要有少的这个趋势就可以。内参，因为wb是半定量的，需要一个同样样品中的，不容易改变的蛋白，作为上样量的参考，一般都是选的管家基因：如：actin，gapdh等。

3 回答2290 围观

问蛋白跑成这样咋办，断断续续的，该怎么解决

bamboopiggy

不是跑胶的问题，是你转膜的三明治夹心没有弄好，有的地方转的不匀

3 回答301 围观

问WB电泳条带弥散不清

bamboopiggy

这个明显是你蛋白浓度高了，你减少一下上样量，20-25ug就够了，不用上太多。太多了，到下面，就压不平了

3 回答2435 围观

问求教！小鼠丘脑定向注射给药如何不容易反流？

天一湖医者

小鼠丘脑定向注射给药具体方法及步骤，希望可以帮到你。

2 回答1470 围观

问购买之细胞冷冻管经解冻后,为何会发生细胞数目太少之情形?

Keven轩

大多是因为在冻存以及复苏的时候，DMSO对细胞产生了毒性，导致细胞死亡，或者是低温导致细胞内液结冰产生冰晶损伤，建议使用全血清和DMSO作为冻存液，并且“慢冻快复”。而且刚复苏时离心转速可以高一些

3 回答527 围观

问大鼠原代施万细胞分离培养如何进行？

Eason老歌迷

目前最简便、快捷分离纯化施万细胞的方法是差速贴壁法，即根据不同细胞在培养器皿上贴壁速度的差异，去除成纤维等污染细胞，以获得高纯度施万细胞。细胞经0.125%胰蛋白酶消化后，制成单细胞悬液，置于未覆层的培养皿中，37℃,5%CO2孵箱中培养30min后，将未贴壁的细胞悬液转种于另－未包被的器皿中，30min后重复以上操作，最后将未贴壁细胞按照合适的密度接种在多聚赖氨酸或Laminin包被的培养器皿中

3 回答1649 围观

问您好，请问怎么hoechst染液检测？hoechst有好几种，该用后面是哪一种编号的呢？

Eason老歌迷

1.对于固定的细胞或组织:a.对于细胞或组织样品，固定后，适当洗涤去除固定剂。随后如果需要进行免疫荧光染色，则先进行免疫荧光染色，染色完毕后再按后续步骤进行 Hoechst 33342染色。如果不需要进行其它染色，则直接进行后续的Hoechst 33342 染色。 b.对于贴壁细胞或组织切片，加入少量Hoechst 33342染色液，覆盖住样品即可;对于悬浮细胞，至少加入待染色样品3倍体积的染

3 回答805 围观

问最近复苏了一支新的细胞，第二天还好好的，传了一代，再过两天液体就变黄变混浊了，还有大片的细胞脱落，不知道是什么原因造成的

zhguxu2001

毫无疑问是污染如果无污染，无论如何不会混浊培养液变黄，是细菌真菌病毒等过度消耗营养物质

7 回答2815 围观

问DNA和RNA核酸稳定性问题

迟C迟

qPCR实验中的DNA模板直接用ddH2O稀释就好了，不要用TE buffer，里面有盐离子，会影响PCR效率。

3 回答1212 围观

问细胞活性氧试剂盒荧光检测

迟C迟

看你的实验步骤没什么问题，应该就是细胞活性氧试剂盒检测的问题，建议换试剂盒。

3 回答1635 围观

问求助！请教！小鼠肺肾脏HE染色分析！谢谢各位老师！

bamboopiggy

丁香小程序里，我不知道怎么放大你的图，太小了，我看不太清楚，只能说，你造模后，损伤了肺泡上皮细胞，造成了肺大泡，然后加药后可以rescue。至于肾脏，Sham组看着肾组织结构正常；CLP组肾小管上皮肿胀、刷状缘缺失、空泡变性、小管坏死、管型形成（这个是猜的，我看不清楚）；加药后肾组织损伤程度rescue了一下

2 回答7344 围观

问请问如何防止植物原生质体细胞贴壁生长？

迟C迟

用缓冲液轻轻吹打，混合均匀再吸取转移，千万手法要轻，原生质体失去细胞壁非常脆弱。或者可以多做几管，只要收集到你够得细胞数量就可以了。

3 回答724 围观

问细胞体外放置多久仍可染色？

Keven轩

四度条件下12h应该没问题吧，时间再长就不行了

3 回答633 围观

问细胞冻存使用培养液可不可以

Guoood

用10%DMSO的全培冻存细胞就可以了，如果细胞比较珍贵也可以用纯血清冻存，而且还可以考虑用商品化的冻存液也有不错的效果。全程保持无菌操作，不需要加抗生素。

5 回答1036 围观

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