细胞活性氧试剂盒荧光检测

相关实验：活性氧自由基和清除体系活性分析

杜皮hia

2022-05-20

所用细胞是HRMECs视网膜内皮细胞

使用了活性氧检测试剂盒在显微镜下观察荧光进行ROS检测

具体实验步骤如下：

活性氧阳性对照组：

用无血清培养基以1：1000稀释活性氧阳性试剂，每孔100微升加入至阳性对照孔中，保温箱培养40min后取出加入探针

探针：

①用无血清培养基以1：1000稀释H2DCFH探针，锡纸包住备用

②吸弃原培养液，用PBS清洗一遍，每孔加入100微升探针溶液，锡箔纸遮光放入培养箱中培养25min

③吸弃培养液，使用无血清培养液清洗两遍洗去浮色，锡箔纸遮光拿到显微镜下观察荧光

做了好几次，一直做不出来荧光，换了碧云天新的试剂盒，也还是出不来，求大神指教，非常感谢！！

3 个回答

迟C迟

2022-05-23

有帮助

看你的实验步骤没什么问题，应该就是细胞活性氧试剂盒检测的问题，建议换试剂盒。

Miracle星

2022-05-21

有帮助

含有较高浓度硝酸盐的培养液容易对本试剂盒的检测产生干扰，请尽量避免。 ¾ 由于检测过程中有还原反应，凡是影响还原反应的氧化或还原试剂要注意避免，例如常用的还原剂DTT和巯基乙醇。 ¾ DAF-FM DA在4℃、冰浴等较低温度情况下会凝固而粘在离心管管底、管壁或管盖内，可以20-25℃水浴温育片刻至全部融解后使用。 ¾ 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

实在不行再换一种品牌的试剂盒