实验问答

21,845,094 科研人在看

科研学霸天团，48小时有问必答

全部

细胞

问细胞培养过程中，发现贴壁细胞表面沾了很多死细胞，传代过程中一直存在怎么破？

bamboopiggy

胰酶消化一下细胞，然后等细胞贴壁后。尽早换液。一般你说的这种是细胞扎堆生长，顶上的细胞容易死

4 回答476 围观

问细胞培养中细胞逐渐死亡？状态变差

Miracle星

我们把这种称为黑胶虫及其分解复合物，是一种常见的细胞污染物。请与细胞共生，髓细胞传代而传代，通常抗生素对其无效黑胶，虫与细胞竞争性生长，对细胞生长不利，严重时导致细胞死亡，目前很多细胞存在被细菌传染污染的现象，对细胞培养及其后续实验造成影响。如果小黑点有增值的趋势，有可能是污染了，需要处理，如果小黑点没有增值趋势且不影响细胞生长，也不影响实验的话，可能是黑胶虫。也有可能是细胞碎片或血清里的沉淀析出

6 回答1039 围观

问请问形成包涵体的融合蛋白，能使用包涵体裂解液之后，用Glutathione Sepharose 4B亲和层析吗？

天一湖医者

使用包涵体裂解液之后，最好选择Glutathione Sepharose这样载量更高,流速更快.

1 回答378 围观

问第一天Pma诱导，第二天换液时观察少数没贴壁大部分是贴壁了，第三天要做实验发现贴下去的有一半都脱落了贴壁只剩一半感觉也是

Miracle星

操作时要避光操作如果你手上这只已经传带很多的话，建议换一只新的，这是直接的方法。检查培养基是否有污染。在传代或复苏前选用包被也包被培养瓶。增加细胞贴壁性。

3 回答383 围观

问培养人干细胞过程中培养液出现小颗粒晶体是什么原因呢？如何处理？

天一湖医者

如果排除枝原体污染的话，注意一下是否因为怕污染而将细胞瓶盖拧得太紧了？CO2进入细胞瓶受阻？松一下瓶盖看看。

3 回答1035 围观

问取小鼠肿瘤组织制备单细胞悬液进行细胞比例测定，必须用新鲜组织吗，能不能用存放的组织？

天一湖医者

细胞比例测定建议最好用新鲜组织。

3 回答418 围观

问可以用S/P20细胞注射小鼠，待小鼠长瘤子之后去瘤细胞吗？如何可以，请问是皮下注射还是腹腔注射？如何去取这个瘤细胞呢？

天一湖医者

可以用S/P20细胞注射小鼠，待小鼠长瘤子之后去瘤细胞。可以选择皮下注射。

2 回答403 围观

问PBMC可以冻存吗？冻存方法和条件是什么呢？

未来9

可以冻存，冻存在液氮中，实验时需要就拿出来解冻后再用。PBMC的冻存条件：预先配置20%的DMSO，4度预冷。

5 回答5422 围观

问怎么确定做多色流式的时候补偿调的合适？只要横平竖直就可以了吗？

天一湖医者

每个荧光素必须要有单染管，也就是只染该荧光素的样本；单染管必须要有阳性群和阴性群，来比较它们之间的平均荧光强度，没有阳性群或阳性群不明显时，可以用商品化微球代替；用于调补偿的抗体必须和实验用的抗体一样，货号不同需要重新调补偿；阴性和阳性细胞的自发荧光水平要一致。

2 回答652 围观

问macs分选的免疫细胞，因为使用了部分表面抗体，后续的激活实验会有很大影响吗？

天一湖医者

是否有影响，取决于几个因素：后续实验和分选的间隔时间。分选时所选用的抗原。分选时所选用的荧光素和后续实验的荧光素的种。

1 回答407 围观

问肝癌细胞huh-7细胞培养有什么特别注意的嘛？一直养不好这个细胞，养着养着就黑了

bamboopiggy

这个细胞系，对血清的要求比较高，你用好点的血清养试试

3 回答519 围观

问测一氧化氮浓度选择的样品

bamboopiggy

细胞裂解液和上清都可以，但是NO，直接不好测，一般测定是一氧化氮合酶

4 回答284 围观

问我想知道这个图怎么分析啊！有大佬嘛！

天一湖医者

构建一个将靶启动子的特定片段插入到荧光素酶表达序列前方的报告基因质粒，如 pGL3-basic 等。将要检测的转录因子表达质粒与报告基因质粒共转染HEK293T细胞或其它相关的细胞系。如果此转录因子能够激活靶启动子，则荧光素酶基因就会表达，荧光素酶的表达量与转录因子的作用强度成正比。加入特定的荧光素酶底物，荧光素酶与底物反应，产生荧光，通过检测荧光的强度可以测定荧光素酶的活性，从而判断转录因子是

2 回答418 围观

问提取细胞RNA时，不小心将trizol试剂打翻洒在了超净工作台上，该如何处理呢

Miracle星

打翻化学试剂或器皿处理的情况不同，大致来说，1瓶中为挥发性有毒或者是有害试剂，立即打开通风设备，疏散试验人员，第2种瓶中为腐蚀性液体时立即清理掉，此处清理应根据具体情况使用物理或化学方法，比如如果有是装有汞的器皿被打破，汞珠散落在地应撒上硫粉处理。第3天中午是几或者是几无毒无害，则应把打翻的事迹清理进废液缸内，再把碎玻璃渣扫掉就差不多可以了。

5 回答2617 围观

问长菌了！求解。操作没有什么问题。

Keven轩

可能是超净台的通风系统出了问题，及时换一下滤芯，同时注意无菌操作，这样看杂菌菌落这么大应该是你的操作问题

3 回答150 围观

问肿瘤细胞传代几天不长也不死。飘了一些。

我愿送他一轮明月

是不是冻存的时候状态就很差？这样就只能换液、慢慢养。

3 回答385 围观

问大家分离神经原代细胞用的消化液和方法是怎样的

Miracle星

培养基选择无血清培养基被认为是最标准最好的培养基，需要的添加剂为B27和谷氨酰胺培养出的细胞状态，均一，胶质细胞几乎不分裂，其中neurobasal是鼠培养级而-a为新生鼠培养基。切忌中途换培养基，要从一而终。

3 回答543 围观

问干细胞CFU计数问题

bamboopiggy

造血干细胞的集落形成检测：1)将所需要的MethoCult®培养基在2-8℃过夜或室温融化。(2)用16 号钝针头的注射器将培养基分装于流式管中（3.3ml/管）(3)准备三个35 mm的培养皿，制备双份培养系统。具体方法如下：把两个35mm的带盖培养皿和一个盛有水的35mm无盖培养皿一起放置到100 mm的培养皿中。(4)准备CD34 细胞，细胞计数仪计数后用0.3mlIMDM 2%FBS稀释细

2 回答883 围观

问电源时有时溴酚蓝晕染特别厉害，都快超过1cm了，有时却很细，这是为什么？成分没换过。

Miracle星

我觉得是不均匀,重新配一下,换下缓冲液电泳缓冲液的问题：因为我以前跑双向的时候也遇到过此现象，后来换用新鲜的电泳缓冲液后溴酚兰就跑得成一条细细的直线了，原理不太清楚。2、分离胶内浓度不均：灌胶的时候胶要混匀，否则胶内浓度不均也会有此现象。3、分离胶凝固不均一：如玻板没洗干净，玻板在灌胶前用吹风吹干时没冷却至室温就灌胶，造成玻板内外温差等。不知正确与否，请大家多讨论。

3 回答286 围观

问植物外泌体或者细胞外囊泡如何提取蛋白质

bamboopiggy

建议你直接买个外泌体蛋白提取的试剂盒吧，都做到这么个份上了，不怕花钱补充一下：thermo有个kit，可以直接提取外泌体得RNA和蛋白质，说明如下：总外泌体 RNA 和蛋白分离试剂盒设计用于从预分离的或富集外泌体中分离 RNA 和蛋白（未提供）。其适用于 RNA 表达（具体为 miRNA）、处理或功能研究。该试剂盒能够回收相同纯化外泌体制备物中的 RNA 和蛋白。其中一部分样品经过有机提取，然后在

3 回答1630 围观

关于丁香通

公司信息

个人用户

企业机构

无忧采购轻松科研

提问

扫一扫

实验小助手

扫码领资料

反馈

TOP

打开小程序