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        文献上用的是NLS(十二烷基肌氨酸钠)提取的,我们实验室没有,所以就用了SDS(十二烷基磺酸钠)提取,但是提到SDS法的论文是同

        相关实验:DNA 降解断裂法检测肿瘤细胞凋亡

        user-title

        Miracle星

        文献上用的是NLS(十二烷基肌氨酸钠)提取的,我们实验室没有,所以就用了SDS(十二烷基磺酸钠)提取,但是提到SDS法的论文是同目不同亚目的昆虫榕小蜂作为实验材料,那么按照榕小蜂的方法可以做啮小蜂吗?方法上需要相应的改进吗?

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        3 个回答

        user-title

        bamboopiggy

        有帮助

        SDS是一种非常高效的表面活性剂,几乎可以使所有的蛋白质溶解。它可以破坏蛋白质的非共价键,从而使蛋白质变性,并丧失天然构象和功能。SDS以质量比1.4:1与蛋白质结合(或一个SDS阴离子结合二个氨基酸分子),因此即使蛋白质样品处于等电点,SDS也能掩饰蛋白质的带电情况,使其带负电。这是被广泛使用的变性聚丙烯酰胺凝胶电泳的原理所在。通常,为了在SDS存在时完全裂解细胞,样品必须经过超声处理或若干次通过19G的针头,从而确保DNA的完全降解。SDS会使蛋白质变性并破坏其三维结构,因此当研究中需要蛋白质的活性或蛋白质的相互作用存在时,不能使用SDS。

        十二烷基肌氨酸钠(Sarkosyl 或Sarcosyl)也叫月桂酰肌氨酸钠,是一种阴离子表面活性剂。它具有两亲性,既有疏水的14碳链(月桂酰)也有亲水的羧基。酰胺键的氮原子没有pH活性且不受pH变化影响而保持中性。羧基的pKa值为3.6,在生理条件下带负电。此外,在宽范围的pH下肌氨酸的表面活性都非常高,表面张力约为3.4 × 10–2 到2.9 × 10–2N/m。有良好的水溶性、高泡沫稳定性和对蛋白强吸附能力等优点被广泛应用于实验研究。它可以抑制DNA转录的启动。作为去污剂,Sarkosyl可以渗透细胞,在蛋白的分离纯化技术中用于蛋白提取,比如免疫印记和间接ELISA。

        所以你可以先做一个预实验看看,不行就需要改条件,行,就可以直接做。

        user-title

        天一湖医者

        有帮助

        可以吧,基本上就是用SDS,液氮研磨,SDS裂解,蛋白酶K消化,有机溶剂抽提,异丙醇沉淀DNA,乙醇漂洗,EB溶解DNA,RNase消化去除RNA即可

        user-title

        未来9

        有帮助

        SDS是十二烷基硫酸钠,十二烷基硫酸钠和十二烷基磺酸钠两者并不一样,在用SDS裂解时要加入蛋白酶K

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