丁香通
丁香园
论坛
医药招聘
丁香医生
更多
调查派
用药助手
丁香搜索
医药数据库
来问医生
我要登录
|
免费注册
|
我的丁香通
企业机构:
成为企业机构
个人用户:
个人中心
移动端
搜实验
大家都在搜
大家都在搜
0 人通过求购买到了急需的产品
免费发布求购
搜索
发布求购
实验专区
实验库(10000+)
实验问答
实验专题
热门视频
前沿资讯
科研者之家
丁香通
>
实验专区
>
实验问答
>
全部
实验问答
25,092,851 科研人在看
科研学霸天团,48小时有问必答
我要提问
全部
细胞
免疫
蛋白质
PCR
DNA
RNA
微生物
动物
遗传
生物信息
其他
问
PCR技术如何应用于亲子鉴定?
Eason老歌迷
利用PCR技术合成的DNA进行亲自鉴定,其原理是:首先获取被测试者的DNA,并进行PCR扩增,取其中一样本DNA用限制性内切酶切成特定的小片段,放进凝胶内,用电泳推动DNA小片段分离,再使用特别的“探针”去寻找基因。相同的基因会凝聚在一起,然后利用特别的染料在X光下,便会显示与DNA探针凝聚于一起的黑色条码,每个人的条码一半与其母亲的条码吻合,另一半与其父亲的条码吻合。
4 回答
1821 围观
4 回答
1821 围观
去回答
问
有关pcr mapping分析基因环境结构的问题
Eason老歌迷
引物长度一般在15-30bp。常用的为18-27bp。引物GC含量一般为40%-60%, 45-55%为宜。引物所对应的模板序列的Tm值在55-80℃之间。可以用ncbi查,然后用Primer Premier设计
4 回答
727 围观
4 回答
727 围观
去回答
问
huh7 细胞培养时应该注意些什么啊?我每次复苏传3-4代就开始状态不好。
balalaLy
新复苏后每次传代传密一点,太疏了长不好。刚开始那几天可以勤一点换液。
4 回答
831 围观
4 回答
831 围观
去回答
问
是否可以对入噬菌体直接进行LA PCR反应?
未来9
可以的,可以直接对菌体直接进行LA PCR反应
5 回答
448 围观
5 回答
448 围观
去回答
问
PCR的循环数可以超过35吗?
未来9
一般不超过35次。随着反应时长加长,会导致非特异性产物相应增加产生干扰;另外设计实验的时候减少循环次数可以减少使用量缩短时间。
5 回答
2252 围观
5 回答
2252 围观
去回答
问
PCR实验的酶该怎么选择?
未来9
根据考虑的指标,如特异性、灵敏度、扩增片段长度、能否进行复杂模板扩增以及优化条件难易等等,我们将主要的Taq酶归归类,其性质、用途也就一目了然了。
3 回答
753 围观
3 回答
753 围观
去回答
问
PCR的延伸温度是怎么调整的?
天一湖医者
PCR反应的延伸温度一般选择在70~75℃之间,常用温度为72℃,过高的延伸温度不利于引物和模板的结合。PCR延伸反应的时间,可根据待扩增片段的长度而定,一般1Kb以内的DNA片段,延伸时间1min是足够的。3~4kb的靶序列需3~4min;扩增10Kb需延伸至15min。延伸进间过长会导致非特异性扩增带的出现。对低浓度模板的扩增,延伸时间要稍长些。
3 回答
5116 围观
3 回答
5116 围观
去回答
问
qPCR试剂盒放了一年还能用么?
未来9
可以的。荧光定量PCR试剂盒保存条件: 收到本产品后,请立即置于-20℃避光保存,一年有效。
4 回答
1211 围观
4 回答
1211 围观
去回答
问
RT-PCR的数据处理方法如何选择?
未来9
常用的相对定量数据分析方法有双标曲线法, ΔCt法, 2-ΔΔCt法(Livak法),用参照基因的ΔCt法和Pfaffl法。对比如下图:
3 回答
1237 围观
3 回答
1237 围观
去回答
问
膜蛋白abcam,说明书只有1个浓度1:50 。二抗1:1000 bioss 整个细胞都有染色不是只有膜上有,需要调整一抗浓度么
bamboopiggy
是,感觉你染的有点过了,降低一下一抗浓度试试。
2 回答
299 围观
2 回答
299 围观
去回答
问
PCR扩增后。没有条带是怎么回事
bamboopiggy
1.引物没有加全,2,酶坏了,3,模板没有加,4,引物特异性不好。5,pcr仪坏了。
3 回答
1713 围观
3 回答
1713 围观
去回答
问
PCR扩增后出现的条带与预计的大小不一致,同时出现特异性扩增带 与非特异性扩增带。非特异性条带的出现,其原因一般是什么呢
天一湖医者
PCR扩增后出现的条带与预计的大小不一致,或大或小,或者同时出现特异性扩增带与非特异性扩增带。非特异性条带的出现,其原因:一是引物与靶序列不完全互补、或引物聚合形成二聚体。二是Mg2+离子浓度过高、退火温度过低,及PCR循环次数过多有关。其次是酶的质和量,往往一些来源的酶易出现非特异条带而另一来源的酶则不出现,酶量过多有时也会出现非特异性扩增。其对策有:①必要时重新设计引物;②减低酶量或调换另一
5 回答
985 围观
5 回答
985 围观
去回答
问
乳液PCR有了解的么?
汤姆卜丽波
有专用的孔隙大,低吸附的枪头,用那种试试
3 回答
1267 围观
3 回答
1267 围观
去回答
问
单链DNA可不可以qpcr,空白对照CT值很高是否异常
bamboopiggy
pcr的原理就是要双链DNA,所以不管是pcr还是qpcr需要的模板都是双链DNA。 空白对照CT值高,可能是引物不特异,形成了引物二聚体。
4 回答
1283 围观
4 回答
1283 围观
去回答
问
什么方法可以降低引物二聚体?
balalaLy
降低引物浓度减少循环次数减少模板用量
6 回答
670 围观
6 回答
670 围观
去回答
问
内标法和外标法哪种数据更精密?
汤姆卜丽波
如果应用外标法能够满足要求的话,当然首选还是外标法,毕竟简单而省事。对于精密度要求比较高、结果准确度会产生重大影响、实验室条件不是很理想的等等条件下,用内标法还是必要的。
4 回答
696 围观
4 回答
696 围观
去回答
问
求助:摇好的菌离心收集后可以放-20度冰箱,过几天再超声裂解菌体提蛋白吗
汤姆卜丽波
我们这样做过,最好是放-80,
4 回答
2791 围观
4 回答
2791 围观
去回答
问
模版非常低,反转录时,扩增长片段5K左右,使用oligo dT,还是特异性引物,更容易扩增出来?
未来9
一般情况简单地说你的目的mRNA有playA尾,且基因较小2000bp以内吧都可以选择oligo dT;基因特异性引物适用于与模板序列互补的引物,适用于目的序列已知的情况.。
3 回答
561 围观
3 回答
561 围观
去回答
问
模板浓度,引物浓度如何摸索?
天一湖医者
常用浓度是10uM/L也就是10pM/L.这样的话,20ul体系加1ul,50ul体系加2ul。
4 回答
1073 围观
4 回答
1073 围观
去回答
问
请问酵母单杂自激活确定抑制剂浓度之后,在点对点验证中目的基因启动子和AD空载组合还会长斑点吗?
天一湖医者
酵母单杂自激活确定抑制剂浓度之后,在点对点验证中目的基因启动子和AD空载组合会长斑点。
3 回答
920 围观
3 回答
920 围观
去回答
1
•••
718
719
720
721
722
•••
1007
跳至
页
意见反馈
合作咨询
提问
扫一扫
实验小助手
扫码领资料
反馈
TOP
打开小程序