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问
请问大家,PCR能测小鼠脑组织吗?有哪些注意事项?
bamboopiggy
但凡是组织都可以进行pcr,,小鼠的组织当然可以。就是注意组织一定要裂解完全
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问
在基因组长片段PCR实验中没有扩增产物可能是什么原因?
秋秋欣欣
首先是考虑模板是否有问题其次考虑引物是否设计有问题最后考虑是否是酶保存不当而失效了
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问
怎么用primer premier来设计自己想要的引物
汤姆卜丽波
首先下载安装并激活Primer Premier 5 软件,打开软件,点击左上角,选择“File”→ “New” →“DNA Sequence”,然后复制参考模板DNA序列,在输入框内点击Ctrl+V键,将DNA序列粘贴进来:接着点击左上角“Primer”按钮,再点击“Search” 按钮,然后选择并输入一些参数,一般最上面点击“PCR Primer”,下面选择“Pairs”,然后输入上游(正义,S
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问
qpcr溶解曲线异常
Junego
1.看NTC的熔解曲线是不是和目的基因的峰值有差异,如果不同,说明是非特异性扩增。也可以将产物跑电泳看看条带是否大小不同。2.如果1中熔解曲线相同,可能有气溶胶污染。看一下Ct值差异,如果NTC和目的基因Ct值差10以上,可以分析一下相对表达量。
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问
设计引物时怎么保留完整的cds区
bamboopiggy
如果要保留完整的cds区,可以保护碱基+酶切位点+cds的start code开始的那一块,保护碱基+酶切位点+cds区的stop code 往前的一段,来设计引物。
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问
为什么我的样品,头一天还可以在显微镜下观察到荧光,第二天就一点也看不到了
whilt-shirt
这是荧光猝灭了,在加完荧光试剂后要加荧光抗猝灭剂
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问
请问细菌浓度用什么方法测定比较好,如何测定?
bamboopiggy
如果你是要数菌的量的话,建议用细胞计数板来计数,OD值只是一个相对值,在0.6-0.8时,菌的状态最好。
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问
噬菌体检测中样品与菌液混合液的水浴起什么作用?
bamboopiggy
水浴起到了活化菌的作用,你的菌可能时间长了,活力不够
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问
为什么我的GAPDH cq值很齐但是microRNA的cq值确相差比较大?
天一湖医者
同时做2到3个housekeeping基因,是个比较好的方法。因为你这里的gapdh显然不太好。
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问
引物扩增以后出现各种多条带,内参条带正常,可能的原因
bamboopiggy
引物不特异,或者是因为annealing temperature过低,出现了非特异结合。还可能是逆转的效果不好。
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问
pcr扩增中用到的DNA聚合酶有哪几种,怎么选择用哪种?预混的好,还是自配的好
bamboopiggy
有做普通pcr的rTaq酶,也有做克隆的,高保真的LA taq酶等等好多,主要看你的实验目的是做genotyping还是做克隆,如果做克隆,根据你片段的长短,也可以选择不同的DNA聚合酶。至于要用预混的还是自配的,也是看你的实验目的,预混的方便,自配的,可以加入一些提高克隆效率的Mg2+或者DMSO,这一切都是根据实验目的。
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问
定量pcr时 重复性不好,我应该从哪些方面找原因呢?
天一湖医者
主要是加样要特别仔细,比如打出液体时确定打完,移走枪头时不要粘附液体。加样完成后顺时离心,保证液体都在底部。pcr管选择质量选择很重要,次品不可以做定量。因为它的均一度不够。
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问
同源重组构建质粒求助
天一湖医者
回收完跑胶测浓度了吗 ,错误一般是亮度太低浓度太低。
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问
细菌质粒构建如何确保准确
天一湖医者
保存质粒用的菌宿主需要小心选择,因为有不少菌株已经工程化,有些缺失了某些纠错系统,有些则还保留着重组体系。典型的是最好不要用表达载体保存质粒,如BL21(DE3)就不适合,由于其没有缺失重组酶RecA。具体可以看各菌株的基因型。常用于保存质粒的菌株有DH5a, XL1-blue, TOP10等。
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问
跑PCR,遭遇没有目标引物序列出现
天一湖医者
你拿到的测序结果,是从引物开始后面30-50个碱基以后开始的序列,引物序列是看不到的。这个和测序机器的性能有关。一般从引物开始的一小段序列出峰会很不稳定,有稳定峰图可以读出序列一般都是20-30个碱基之后了。你手头若是有峰图结果你看看最开始那段的峰图就知道了。至于拿到的序列到底是什么,ncbi上blast一下不就什么都知道了
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问
WB没有目的条带,咋回事
天一湖医者
蛋白提取的不好;样品保存不当;处理条件不对;甚至有些WB操作问题等等
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问
质粒过表达1000多倍,这正常吗???
灵枢天问
正常的。如果本身表达够低,这种情况就很正常
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问
建立过敏性鼻炎小鼠模型时,年龄选择有什么依据(详细)?不到年龄或者过了年龄有什么影响?
天一湖医者
年龄选择一般为6-7周,具体可以参考https://wenku.baidu.com/view/34d604dd0a75f46527d3240c844769eae009a324?bfetype=new
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问
sybr Green、Taqman、Molecularbeacon、LUX这些方法如何选择?
Eason老歌迷
还是根据你实验室的条件,和你自己的个人习惯进行选择。我们比较喜欢用sybr green,便宜好用
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问
BPGA泛基因组分析
bamboopiggy
对,是你的软件安装有问题,估计是版本和你的电脑不match
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