• 我要登录|
  • 免费注册
    |
  • 我的丁香通
    • 企业机构:
    • 成为企业机构
    • 个人用户:
    • 个人中心
  • 移动端
    移动端
丁香通 logo丁香实验_LOGO
搜实验

    大家都在搜

      大家都在搜

        0 人通过求购买到了急需的产品
        免费发布求购
        发布求购

        PCR出现条带与预计大小不一致的非特异性扩增怎么处理?

        相关实验:逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR,rtpcr)

        user-title

        luckycan

        wx-share
        分享

        3 个回答

        user-title

        bamboopiggy

        有帮助

        你的目的条带出来了么?如果出现目的条带,可以切胶回收,如果没有出现目的条带,考虑引物不特异。或者是你pcr的退火温度不合适

        user-title

        whilt-shirt

        有帮助

        纯化核酸模板,重新设计引物试试

        user-title

        未来9

        有帮助

        PCR扩增后出现的条带与预计的大小不一致,或大或小,或者同时出现特异性扩增带 与非特异性扩增带.非特异 性条带的出现,其原因:一是引物与靶序列不完全互补、 或引物聚合形成二聚体.二是Mg2+离子浓度过高、退 火温度过低,及PCR循环次数 过多有关.其次是酶的质和量,往往一些来源的酶易出现非特异条带而另一来源的 酶 则不出现,酶量过多有时也会出现非特异性扩增.其对策有:①必要时重新设计引 物.②减低酶量或调换另一 来源的酶.③降低引物量,适当增加模板量,减少循环次 数.④适当提高退火温度或采用二温度点法(93℃变 性,65℃左右退火与延伸).

        ad image
        提问
        扫一扫
        丁香实验小程序二维码
        实验小助手
        丁香实验公众号二维码
        扫码领资料
        反馈
        TOP
        打开小程序