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问
PCR如何减少二聚体及非特异性产物?
Eason老歌迷
你可以从下面几个原因里找出对策:重新设计你的引物;也有可能模板有问题;你的模板浓度过小,适当加大模板量;你的Taq酶,引物,Mg2+浓度可能过高;取你所要加的上下游引物混合后,在100摄氏度下的沸水中煮5分钟,然后迅速拿出至于冰块之上瞬时冷却,这时再加入反应体系当中,引物二聚体就会消失的;若降低退火温度,发现还是只有引物二聚体,而且镁离子的浓度在 20-25mmol/l没有区别,则考虑Buffer
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问
PCR实验过程中无扩增产物什么情况
bamboopiggy
可能模板没加,酶坏了,仪器坏了,你阳性对照出来么?
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问
PCR实验过程中假阳性扩增怎么办
汤姆卜丽波
假阳性一般是交叉污染,加样过程中或者存储过程中混淆了,操作时应小心轻柔,防止将靶序列吸入加样枪内或溅出离心管外;所有器材均应高压消毒。所用离心管及加样枪头等均应一次性使用。各种试剂分装准备
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问
PCR实验过程中被污染怎么办?
whilt-shirt
这种情况你可以重新跑一块板子试试
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问
从琼脂糖凝胶中纯化 PCR 片段时,缺口的DNA 有点多,已经减少对凝肢的照射时间了,还有别的办法能增加成功的DNA环吗?
bamboopiggy
你是说你pcr 的DNA胶回收以后,DNA突变多么?可以考虑是不是模板的问题。
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问
求助!肠杯状细胞AB-PAS染色
灵枢天问
这个没有关系的,试剂盒用料不同染出来可能都有差异,不影响你的结果,只要形态可以看到就可以的
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问
多巴染色法染色细胞的话。从Bouin固定液中拿出可以直接保存在70%的酒精里放进冰箱备用吗?(没有短时间限制的那种)
天一湖医者
可以,用Bouin固定液固定后,组织可稍微流水冲洗或不冲洗直接转入70%的乙醇脱水,然后放入冰箱保存备用。
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问
双链DNA琼脂糖电泳没有任何条带,但是聚丙烯酰胺核酸电泳有条带.DNA和抗体偶联,两个都没跑出来条带,这是为什么呀
天一湖医者
有很多可能性:1.样品中没有dna,或者dna太少,或者dna已经降解。2. dna较小而电泳时间太长,导致dna跑了出去。3. dna太大,还在加样孔附近,甚至还没有跑到胶里。
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问
新冠病毒检测曲线从起点就向上趋势是什么原因?
天一湖医者
可能原因,软件在进行基线自动扣除的时候出现错误,引起了扩增曲线抬升。或探针浓度过高,体系中有荧光物质污染,扩增效率低。
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问
细胞污染嘛,第一张没有细胞只有培养基。接下来三张有细胞,黑色的是什么东西?
bamboopiggy
只能说是你培养基污染了,里面养的菌,因为图太小了,看不清楚
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问
细胞汇合度达到多少时进行饥饿处理?
汤姆卜丽波
我们一般是看细胞生长密度占到培养瓶或者培养皿底面积百分之八十,就开始饥饿处理
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问
看不到自己目的蛋白处有增高的趋势?
汤姆卜丽波
你是合成重组质粒然后转到细胞里的么,质粒测序了么,FLAG标签确定加上了么?如果确定加上了,那有可能是转染,后面一系列操作,一步一步看,都确定没问题了就只能重跑了
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问
MOLM-13细胞传代之后密度有点稀,怎么能让细胞快速长起来?
天一湖医者
可以改变培养液条件,如增加FBS的含量(10%-20%)、增加一些生长因子等方法,
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问
transwell实验可以上室加含10%%血清培养基细胞混液,下室加20%培养基?
bamboopiggy
transwell一般上室用的是无血清培养基,下室用10%的,你这个感觉也可行,就是细胞向营养丰富的地方爬。水化,是你在做实验前,用培养基浸泡那个膜,然后等做实验之前,再吸掉就好。
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问
B16细胞黑色素含量测定
bamboopiggy
这个是因为你用碱溶MSH的问题,你试试调整一下配好溶液的PH值。
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问
请问SW620细胞形态是正常的吗
天一湖医者
从图片上看,SW620细胞形态是正常的。
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问
请教卵巢免疫组化问题
天一湖医者
1.先不复染,观察一下,看是否核、质均有表达,再用苏木精副染核,看核周围胞质还有无信号。2.如果核表达不确定,可以用染胞质的复染染料如快绿,这样就可看到核中信号是否存在。
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问
IHC不显色,加了DAB后不显色是什么原因
天一湖医者
1. DAB显色液需现配现用。2. 显色时间不宜过长。
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问
物种与抗体免疫原同源75%,能用吗?
天一湖医者
免疫组化影响因素较多,不太好说,可以试下。
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问
请问各位实验大神,用cck8单纯的测细胞增值实验,数据怎么分析,可以直接用OD值作图吗
balalaLy
一般是以对照组的OD值为1转化为相对值进行做图
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