实验问答

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问PCR技术如何应用于亲子鉴定？

Eason老歌迷

利用PCR技术合成的DNA进行亲自鉴定，其原理是：首先获取被测试者的DNA，并进行PCR扩增，取其中一样本DNA用限制性内切酶切成特定的小片段，放进凝胶内，用电泳推动DNA小片段分离，再使用特别的“探针”去寻找基因。相同的基因会凝聚在一起，然后利用特别的染料在X光下，便会显示与DNA探针凝聚于一起的黑色条码，每个人的条码一半与其母亲的条码吻合，另一半与其父亲的条码吻合。

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问有关pcr mapping分析基因环境结构的问题

Eason老歌迷

引物长度一般在15-30bp。常用的为18-27bp。引物GC含量一般为40%-60%， 45-55%为宜。引物所对应的模板序列的Tm值在55-80℃之间。可以用ncbi查，然后用Primer Premier设计

4 回答636 围观

问huh7 细胞培养时应该注意些什么啊？我每次复苏传3-4代就开始状态不好。

balalaLy

新复苏后每次传代传密一点，太疏了长不好。刚开始那几天可以勤一点换液。

4 回答750 围观

问是否可以对入噬菌体直接进行LA PCR反应?

未来9

可以的，可以直接对菌体直接进行LA PCR反应

5 回答374 围观

问PCR的循环数可以超过35吗？

未来9

一般不超过35次。随着反应时长加长，会导致非特异性产物相应增加产生干扰；另外设计实验的时候减少循环次数可以减少使用量缩短时间。

5 回答2026 围观

问PCR实验的酶该怎么选择？

未来9

根据考虑的指标，如特异性、灵敏度、扩增片段长度、能否进行复杂模板扩增以及优化条件难易等等,我们将主要的Taq酶归归类,其性质、用途也就一目了然了。

3 回答670 围观

问qPCR试剂盒放了一年还能用么？

未来9

可以的。荧光定量PCR试剂盒保存条件: 收到本产品后,请立即置于-20℃避光保存,一年有效。

4 回答1089 围观

问RT-PCR的数据处理方法如何选择？

未来9

常用的相对定量数据分析方法有双标曲线法， ΔCt法， 2-ΔΔCt法(Livak法)，用参照基因的ΔCt法和Pfaffl法。对比如下图：

3 回答1070 围观

问膜蛋白abcam，说明书只有1个浓度1:50 。二抗1:1000 bioss 整个细胞都有染色不是只有膜上有，需要调整一抗浓度么

bamboopiggy

是，感觉你染的有点过了，降低一下一抗浓度试试。

2 回答255 围观

问PCR扩增后。没有条带是怎么回事

bamboopiggy

1.引物没有加全，2，酶坏了，3，模板没有加，4，引物特异性不好。5，pcr仪坏了。

3 回答1630 围观

问PCR扩增后出现的条带与预计的大小不一致，同时出现特异性扩增带与非特异性扩增带。非特异性条带的出现，其原因一般是什么呢

天一湖医者

PCR扩增后出现的条带与预计的大小不一致，或大或小，或者同时出现特异性扩增带与非特异性扩增带。非特异性条带的出现，其原因：一是引物与靶序列不完全互补、或引物聚合形成二聚体。二是Mg2+离子浓度过高、退火温度过低，及PCR循环次数过多有关。其次是酶的质和量，往往一些来源的酶易出现非特异条带而另一来源的酶则不出现，酶量过多有时也会出现非特异性扩增。其对策有：①必要时重新设计引物；②减低酶量或调换另一

5 回答592 围观

问乳液PCR有了解的么？

汤姆卜丽波

有专用的孔隙大，低吸附的枪头，用那种试试

3 回答1069 围观

问NEAT1基因有两个转录本，长的转录本是在短的转录本基础上的延长，这种情况下怎么设计针对短转录本的特异引物？

Eason老歌迷

NEAT1基因其实有两个转录本：NEAT1_1和NEAT1_2, NEAT1_1(3.7 kb in humans, 3 kb in mice)与NEAT1_2 (23 kb In humans, 20 kb in mice)的5’末端完全重合，两个转录本均只包含一个外显子，而且均留在核内。NEAT1_1多聚腺苷化，类似于mRNA，而NEAT1_2对paraspeckles至关重要，构成其“arc

3 回答775 围观

问单链DNA可不可以qpcr,空白对照CT值很高是否异常

bamboopiggy

pcr的原理就是要双链DNA，所以不管是pcr还是qpcr需要的模板都是双链DNA。空白对照CT值高，可能是引物不特异，形成了引物二聚体。

4 回答1226 围观

问什么方法可以降低引物二聚体?

balalaLy

降低引物浓度减少循环次数减少模板用量

6 回答568 围观

问内标法和外标法哪种数据更精密?

汤姆卜丽波

如果应用外标法能够满足要求的话，当然首选还是外标法，毕竟简单而省事。对于精密度要求比较高、结果准确度会产生重大影响、实验室条件不是很理想的等等条件下，用内标法还是必要的。

4 回答563 围观

问求助：摇好的菌离心收集后可以放-20度冰箱，过几天再超声裂解菌体提蛋白吗

汤姆卜丽波

我们这样做过，最好是放-80,

4 回答2717 围观

问模版非常低，反转录时，扩增长片段5K左右，使用oligo dT，还是特异性引物，更容易扩增出来？

未来9

一般情况简单地说你的目的mRNA有playA尾，且基因较小2000bp以内吧都可以选择oligo dT；基因特异性引物适用于与模板序列互补的引物,适用于目的序列已知的情况.。

3 回答497 围观

问模板浓度，引物浓度如何摸索？

天一湖医者

常用浓度是10uM/L也就是10pM/L.这样的话，20ul体系加1ul，50ul体系加2ul。

4 回答912 围观

问请问酵母单杂自激活确定抑制剂浓度之后，在点对点验证中目的基因启动子和AD空载组合还会长斑点吗？

天一湖医者

酵母单杂自激活确定抑制剂浓度之后，在点对点验证中目的基因启动子和AD空载组合会长斑点。

3 回答834 围观

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