实验问答

21,952,856 科研人在看

科研学霸天团，48小时有问必答

全部

细胞

问怎么用primer premier来设计自己想要的引物

汤姆卜丽波

首先下载安装并激活Primer Premier 5 软件，打开软件，点击左上角，选择“File”→ “New” →“DNA Sequence”，然后复制参考模板DNA序列，在输入框内点击Ctrl+V键，将DNA序列粘贴进来:接着点击左上角“Primer”按钮，再点击“Search” 按钮,然后选择并输入一些参数，一般最上面点击“PCR Primer”，下面选择“Pairs”,然后输入上游（正义，S

6 回答1311 围观

问设计引物时怎么保留完整的cds区

bamboopiggy

如果要保留完整的cds区，可以保护碱基+酶切位点+cds的start code开始的那一块，保护碱基+酶切位点+cds区的stop code 往前的一段，来设计引物。

4 回答435 围观

问为什么我的样品，头一天还可以在显微镜下观察到荧光，第二天就一点也看不到了

whilt-shirt

这是荧光猝灭了，在加完荧光试剂后要加荧光抗猝灭剂

5 回答371 围观

问请问细菌浓度用什么方法测定比较好，如何测定？

bamboopiggy

如果你是要数菌的量的话，建议用细胞计数板来计数，OD值只是一个相对值，在0.6-0.8时，菌的状态最好。

5 回答8683 围观

问噬菌体检测中样品与菌液混合液的水浴起什么作用？

bamboopiggy

水浴起到了活化菌的作用，你的菌可能时间长了，活力不够

2 回答405 围观

问为什么我的GAPDH cq值很齐但是microRNA的cq值确相差比较大？

天一湖医者

同时做2到3个housekeeping基因，是个比较好的方法。因为你这里的gapdh显然不太好。

3 回答441 围观

问引物扩增以后出现各种多条带，内参条带正常，可能的原因

bamboopiggy

引物不特异，或者是因为annealing temperature过低，出现了非特异结合。还可能是逆转的效果不好。

4 回答340 围观

问pcr扩增中出现的非特异性条带

Eason老歌迷

一般出现非特异性条带，我们可以用下面的办法解决，降低引物和聚合酶的用量，提高退火温度，或者是采用梯度PCR法，测试能够获得最佳结果的温度退火。如果还是不行，就试试touchdown方法，退火温度从高到低，每隔一个反应温度下降1C或者怎么样的，这样可以便于扩增出特异性更好的条带。当然，如果模板可以纯化一下，或者重新制备，也可以避免有非特异物质或者是降解的片段干扰。总之就是先优化。实在不行需要重新设计

4 回答3069 围观

问18T质粒测序结果比对不上

天一湖医者

1、测序结果比对时候，选用反向互补；如果依旧不对，2、可能是没连上去，因为PCR能扩出条带，不一定就是你目标条带，PCR不严格，不能完全说明问题。此种情况，建议，挑选多个单克隆，进行PCR，挑选最亮的且条带大小一致的送去测序。

6 回答835 围观

问pcr扩增中用到的DNA聚合酶有哪几种，怎么选择用哪种？预混的好，还是自配的好

bamboopiggy

有做普通pcr的rTaq酶，也有做克隆的，高保真的LA taq酶等等好多，主要看你的实验目的是做genotyping还是做克隆，如果做克隆，根据你片段的长短，也可以选择不同的DNA聚合酶。至于要用预混的还是自配的，也是看你的实验目的，预混的方便，自配的，可以加入一些提高克隆效率的Mg2+或者DMSO，这一切都是根据实验目的。

6 回答2621 围观

问定量pcr时重复性不好，我应该从哪些方面找原因呢？

天一湖医者

主要是加样要特别仔细，比如打出液体时确定打完，移走枪头时不要粘附液体。加样完成后顺时离心，保证液体都在底部。pcr管选择质量选择很重要，次品不可以做定量。因为它的均一度不够。

4 回答438 围观

问同源重组构建质粒求助

天一湖医者

回收完跑胶测浓度了吗，错误一般是亮度太低浓度太低。

5 回答598 围观

问细菌质粒构建如何确保准确

天一湖医者

保存质粒用的菌宿主需要小心选择，因为有不少菌株已经工程化，有些缺失了某些纠错系统，有些则还保留着重组体系。典型的是最好不要用表达载体保存质粒，如BL21(DE3)就不适合，由于其没有缺失重组酶RecA。具体可以看各菌株的基因型。常用于保存质粒的菌株有DH5a, XL1-blue, TOP10等。

4 回答512 围观

问跑PCR，遭遇没有目标引物序列出现

天一湖医者

你拿到的测序结果，是从引物开始后面30－50个碱基以后开始的序列，引物序列是看不到的。这个和测序机器的性能有关。一般从引物开始的一小段序列出峰会很不稳定，有稳定峰图可以读出序列一般都是20－30个碱基之后了。你手头若是有峰图结果你看看最开始那段的峰图就知道了。至于拿到的序列到底是什么，ncbi上blast一下不就什么都知道了

4 回答443 围观

问WB没有目的条带，咋回事

天一湖医者

蛋白提取的不好；样品保存不当；处理条件不对；甚至有些WB操作问题等等

6 回答526 围观

问质粒过表达1000多倍，这正常吗？？？

灵枢天问

正常的。如果本身表达够低，这种情况就很正常

6 回答1956 围观

问建立过敏性鼻炎小鼠模型时，年龄选择有什么依据（详细）？不到年龄或者过了年龄有什么影响？

天一湖医者

年龄选择一般为6-7周，具体可以参考https://wenku.baidu.com/view/34d604dd0a75f46527d3240c844769eae009a324?bfetype=new

5 回答470 围观

问sybr Green、Taqman、Molecularbeacon、LUX这些方法如何选择?

Eason老歌迷

还是根据你实验室的条件，和你自己的个人习惯进行选择。我们比较喜欢用sybr green，便宜好用

5 回答666 围观

问探针法多重PCR，扩增时，各条探针平台期荧光信号强度相差大，有必要使信号强度一致吗？

Eason老歌迷

并不需要!但是如果你以后想荧光信号差不多一致的话，可以注意下面的几个点:确保加样的准确性，确保移液的精准度，体系混匀并进行离心，qPCR试剂的选择：选择“预混液”形式的qPCR试剂，反应体系只需加入引物和模板，大大简化实验的操作步骤，减少了加样误差。

3 回答518 围观

问BPGA泛基因组分析

bamboopiggy

对，是你的软件安装有问题，估计是版本和你的电脑不match

3 回答676 围观

关于丁香通

公司信息

个人用户

企业机构

无忧采购轻松科研

提问

扫一扫

实验小助手

扫码领资料

反馈

TOP

打开小程序