实验问答

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科研学霸天团，48小时有问必答

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问【求助】请问高脂联合腹腔注射维生素D3建立大鼠动脉粥样硬化模型有成功的吗？想询问相关细节

于小鱼鱼1998

注射剂量可以从0.1ug/kg开始注射

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问细胞不清楚那一块，调节焦距后是第一张图那样，这种是污染吗，

土井挞克树

看着像是污渍，不像是微生物污染，可以清洁培养基看看

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问对中药粉末用乙醇提取回流的时候，什么时候开始计时是准的？

土井挞克树

一般是以沸腾作为起始时间进行计时

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问GST标签的pulldown实验洗不干净怎么办

土井挞克树

用流动的蒸馏水进行冲洗，冲洗3-5次

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问rtpcr和qrtpcr哪一个更精准

土井挞克树

当然是qrtpcr更精准，敏感度高然后准确度高

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问我想请问一下对于糖蛋白组学的数据如何分析呢？

huarenqiang5

这个一般需要专业的数据分析软件进行分析，可以使用GlycanFinder 软件试试。

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问蛋白理化分析都有哪些指标及方法？

dxy_mqg1dtg8

1. 分子量：可以通过SDS-PAGE、MALDI-TOF MS、ESI-MS等方法来测定蛋白质的分子量。2. 含量：可以通过BCA、Bradford、Lowry等方法来测定蛋白质的含量。3. 等电点：可以通过IEF、色谱等方法来测定蛋白质的等电点。4. 构象：可以通过CD、FTIR、荧光光谱、X射线晶体学等方法来测定蛋白质的构象。5. 热力学性质：可以通过DSC、ITC等方法来测定蛋白质的热力学

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问蛋白提取时样品中蛋白的均一性不好怎么办

dxy_mqg1dtg8

可以尝试以下几种方法：1.细胞破碎条件的优化：细胞破碎是蛋白提取的关键步骤，可以选择适当的细胞破碎方法和条件。常见的方法包括超声波破碎、冻融破碎、高压破碎等。不同的样品可能需要不同的破碎方法和条件，因此可以尝试优化细胞破碎条件，如破碎时间、温度、破碎缓冲液的配比等，以提高蛋白的均一性。2.添加蛋白质稳定剂：蛋白质稳定剂可以帮助维持蛋白的稳定性和均一性。常用的蛋白质稳定剂包括蛋白酶抑制剂、还原剂和胺

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问如何提高bca测蛋白浓度的标准曲线的R值

dxy_mqg1dtg8

以下是一些提高BCA测蛋白浓度标准曲线R值的方法：1. 充分混合工作试剂：在进行BCA测定时，工作试剂的各个成分需要充分混合均匀，否则可能会影响测定结果的准确性和可重复性。因此，在使用BCA试剂盒时，需要充分摇匀工作试剂，确保各个成分均匀混合。2. 优化标准曲线的制备：标准曲线的制备对于BCA测定结果的准确性和可重复性至关重要。为了提高标准曲线的R值，可以优化标准品的浓度和数量，以及标准曲线的拟合

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问使用AdEasy构建腺病毒载体质粒，X10-gold扩增后，挑单克隆提质粒，PacI酶切线性化，并未出现两条条带！

dxy_mqg1dtg8

通常情况下，提质粒和酶切是验证腺病毒载体质粒的常用方法，但是如果您希望避免浪费酶，也可以尝试使用PCR进行验证。以下是一些可能的方法：1. 用限制性内切酶验证：您可以设计一对引物，将其扩增出期望的片段，然后使用限制性内切酶对扩增产物进行切割，以验证是否得到了正确的片段。2. 用测序验证：您可以通过将扩增产物进行测序来验证是否得到了正确的片段。

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问目前单细胞的蛋白质组学测序分析有哪些常用的方法？

dxy_mqg1dtg8

1. 质谱技术：质谱技术是目前最为常用的单细胞蛋白质组学技术之一。最近，研究人员开发了一种称为SLIM（single-cell proteomics by mass spectrometry）的技术，可以在单个细胞中检测到超过500个蛋白质。此外，研究人员还利用微流控技术和质谱技术，开发出了一种名为SCoPE-MS（single-cell proteomics by multiplexed seq

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问关于单细胞测序

dxy_mqg1dtg8

单细胞测序在血液病领域具有广泛的应用价值。以下是一些可能的方向：1. 了解血液病的病理机制：单细胞测序可以帮助研究人员探究血液病的病理机制。例如，单细胞测序可以帮助鉴定癌细胞和正常细胞之间的转录差异，以及基因表达水平和细胞类型之间的关系。2. 识别血液病的亚型和分子标记：单细胞测序可以帮助鉴定血液病的亚型和分子标记。例如，单细胞测序可以帮助研究人员识别癌细胞的特异性表达基因，从而为临床治疗提供更精

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问限制性内切酶的奇怪问题

dxy_mqg1dtg8

这种情况可能是由于GGATCC的酶切位点与GGTACC的酶切位点具有相似度，导致在实验中发生了错误的酶切和连接。虽然GGATCC并不是理想的KpnI酶切位点，但由于GGATCC与GGTACC有相似的序列，可能在一定程度上被KpnI酶识别并切割。这种情况下，片段虽然没有按预期的方式被切开，但仍然能够与载体连接上。这种情况的发生可能是由于酶切位点设计时的误差或实验操作中的错误导致的。在设计引物时，建议

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问IL-1β诱导细胞炎症模型

dxy_mqg1dtg8

在建立IL-1β诱导的细胞炎症模型时，无血清培养基可以降低背景炎症反应，减少干扰因素，使实验结果更加准确。因此，无血清培养基在这种情况下是更为常见的选择。如果使用无血清培养基，添加药物逆转后，应继续使用无血清培养基进行后续处理和加药。因为血清中可能存在一些未知因素，可能会影响药物的逆转效果。如果需要使用含血清的培养基，则需要在实验前对血清进行筛选，选择质量稳定、背景低的血清才能保证实验结果的准确性

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问SiRNA

dxy_mqg1dtg8

si-GAPDH阳性对照的敲低率可以通过以下公式计算：敲低率 = (GAPDH-siRNA处理组的表达水平 - 对照组的表达水平) / 对照组的表达水平在计算敲低率时，通常将GAPDH视为内参基因，也就是用来进行数据归一化和相对定量的基因。因此，对于si-GAPDH阳性对照实验，我们会将GAPDH作为目的基因，将GAPDH-siRNA处理组和对照组的表达水平进行比较，以计算敲低率。

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问求助丨文献中右上角带有三角的图例看不懂

于小鱼鱼1998

cre和yfp都是起标志作用的

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问蛋白表达

于小鱼鱼1998

你可以通过ncbi网站或者pubmed网站进行查询

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问cGAMP刺激细胞，激活sting

小小翻车鱼

要将cgAMP（环鸟苷酸）加入细胞中，通常需要使用一种转染方法。常用的转染方法包括脂质体转染、电穿孔转染和病毒载体转染等。这些方法可以大大提高cgAMP进入细胞的效率。

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问Elisa实验皮肤样品匀浆处理。

dxy_3rh9wh0e

50mg组织加1mlpbs和10ul蛋白酶抑制剂

4 回答1477 围观

问SEER数据库中有可用的免疫治疗数据吗？

土井挞克树

有的，直接去seer数据库搜免疫相关数据

5 回答1475 围观

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