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        含双酶切位点的成熟肽段引物设计

        相关实验:任意引物 PCR

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        空有黄昏亦打烊

        请前辈指点,我在文献中看到了一段已经加了保护碱基和酶切位点的成熟肽段。文中说直接用这段基因设计引物,并且得到的产物与成熟肽段等长。后来我将文献中的成熟肽段与上游引物做对比,发现上游引物最开始会有几个碱基,然后与成熟肽段第一个碱基相同。

        所以我想问问文献中的引物到底是如何设计的?为什么引物的前几个碱基设置超出了成熟肽段基因。

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        3 个回答

        user-title

        高山云初

        有帮助

        连入质粒中的重要目的就是进行酶切和连接,当然首先就是在想要合成或者是进行 PCRT 增出靶基因的时候在核酸的两端接入酶切位点,酶切位点是与你的质粒的特点相关的 可以在质粒的图谱说明书上找取相应的位点,进行设计。

         

        user-title

        开水白菜zjl

        有帮助


        1. 成熟肽段的引物是否存在与表达载体同源的同源臂序列
        2. 保护碱基的数目不同影响核酸内切酶的切割效率,这种现象是存在的,可以查一下内切酶的保护碱基表核实一下
        user-title

        sswei

        有帮助

        引物设计时应该考虑到引物要有不受基因组DNA污染影响的能力,即引物应该跨外显子,最好是引物能跨外显子的接头区,这样可以更有效的不受基因组DNA污染的影响。

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