实验问答

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科研学霸天团，48小时有问必答

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细胞

问小鼠饲养过程中生长速度不一样，应该如何处理？

bamboopiggy

找个体差不多大的小鼠做实验，太大或太小的舍弃。否则一开始variation就太大了

3 回答372 围观

问原代细胞培养如何避免细菌感染？

bamboopiggy

规范无菌操作，尤其是取材的动物一定要用酒精泡过，才能拿进超净台。用到的器械一定要高压灭菌

4 回答622 围观

问RT－pcr，跑出来是一条直线是什么原因？

迟C迟

一条线说明未起峰，未检测到目的基因。检查模板制备、引物、体系是否有问题。

6 回答2740 围观

问甘油法制备的感受态，是可以直接用热激转化还是可以电转？

迟C迟

感受态细胞制备方法不影响后续电转，可以用电激法转化。

3 回答571 围观

问wb实验有一组内参Gapdh爆不出来

balalaLy

其它样品都出来了，那就说明是样品本身的问题，蛋白量低，或者是你煮蛋白前忘记加蛋白了

7 回答1241 围观

问qpcr的结果求助？

Eason老歌迷

做的挺好😄。很棒。还是要提醒你一句。设计引物有几个需要注意的点。如下:产物不能形成二级结构。引物长度一般在15~30碱基之间。G+C含量在40%~60%之间。引物自身不能有连续4个碱基的互补。引物5′端可以修饰，引物3′端不可修饰。引物3′端要避开密码子的第3位。等

4 回答720 围观

问求助｜荧光定量这样的结果是不是意味着目的基因未表达

dxy_dfr562pw

如果操作和引物探针确定没问题的话，应该是没表达啥目的基因了……

5 回答308 围观

问关于RNA纯度的问题？

天一湖医者

不可以，因为RNA纯度包括样品的纯度和自身的完整性。

4 回答588 围观

问OD260/OD280的值出现NAN/INF是什么意思

天一湖医者

NAN无效数字INF无穷大说明有问题，建议重新试试。

3 回答559 围观

问大佬看一下，细胞是否污染了霉菌

天一湖医者

从图片看是污染了，看着像酵母污染。

3 回答300 围观

问最近细胞一直污染，基本都是这种，请问这是什么污染，怎么处理

balalaLy

细胞污染属于概率问题，很难搞清楚是属于哪种污染，直接弃掉最省时省力

3 回答268 围观

问求问这是真菌污染吗？

天一湖医者

看着是真菌污染，一般培养液清亮，不变色，镜下有丝状物，有些真菌开始很像死细胞碎片，只是它很多很多的小块很清楚，象珊瑚状，不象细胞碎片分不清，慢慢的会长出很细的黑色丝状物。真菌生长的比较慢，不象细菌那么容易被发现，但是一旦发现有它的存在细胞就被污染了，也很难救活了。

3 回答193 围观

问肺克 pfge 条带模糊跑不出来

天一湖医者

从这张图上看，加样孔不是太亮，你加的细菌的量可能有点少，就是细菌的浓度有点低，如果切开的话，很多条带也会很模糊；.可以设置对照孔，加酶和不加酶的，同时设置多组时间酶切，以节省时间；

3 回答572 围观

问某个氨基酸缺失对蛋白功能影响可以用什么软件预测下致病性

迟C迟

可用NCBI的子程序预测蛋白结构，还有UniProt、SWISS、 STRING、ProtParam等数据库都可以试试。

3 回答451 围观

问求教:HL-1细胞空泡

bamboopiggy

一开始的细胞空泡，可能是细胞老化的原因，传代过程中，这些细胞会死掉。后面小RNA干扰出现的空泡，可能跟你的转染试剂有关系。至于买细胞，你可以找那家公司在国内的代理帮忙买。

3 回答449 围观

问怎么通过qpcr技术测定基因敲除鼠基因的表达

balalaLy

这题我真会，取鼠尾提DNA 跑pcr，引物及产物大小一般构建小鼠的公司会提供给你，pcr产物跑胶，wt只有一条条带，纯合子只有一条比wt小的目标条带，杂合子有两条条带，上面的那条跟wt同大小，下面那条跟homo同大小

3 回答498 围观

问发文章时pcr实验要哪些原始数据

Eason老歌迷

可能需要你的原始图片，甚至还有荧光定量的数据。或者一些溶解曲线，之类的。

6 回答13631 围观

问有没有大佬知道PCR 突然扩增不出产物是什么原因？

Eason老歌迷

可能是以下原因导致的，你可以看看模板DNA是否被降解，引物浓度是不是合适，自己再那个说明书的浓度范围再设置一个范围去摸索一下。或者你的引物设计是不是合适。

6 回答622 围观

问我想问下有人做过RNA核质分离实验吗？

Eason老歌迷

我们也遇到过类似情况。我们觉得可能是由于实验中操作或者其他原因导致核泄漏了，细胞核内的物质到了胞质中。

3 回答2020 围观

问关于随机引物反转录的一些问题

Eason老歌迷

你想纯化，但是发现没有过滤掉短的，是这样吗？我有一个方法，可以试一试。1. 20μLPCR产物加入5 μL 5M的NaCl（终浓度0.5 M）。2. 加入25 μL 24%的PEG8000溶液（终浓度12%）；混匀。3. 4度放置30 min。4. 4500 g，4℃离心30 min 后，立即将板反扣在厚的吸水纸上，离心至150 g，去除上清。5. 加入70 μL 75%EtOH，4500 g，4

3 回答531 围观

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