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问
荧光定量pcr检测解脲支原体dna阳性说明什么?
秋秋欣欣
解脲支原体阳性,提示存在解脲支原体的污染
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问
怎么确定很好的荧光定量PCR的引物,具体看哪些参数进行区分呢?
汤姆卜丽波
引物最好位于编码区5’端的300-400bp,无二级结构(自由能小于58.61KJ/mol),长度一般在17-25碱基之间,G+C含量45-55%,TM58-62
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问
请问qPCR引物合成出来大概多久内要用完?怎么样验证一下我放了很久的qPCR引物是否还可以用?
天一湖医者
如果放入-20度的话,可以一年。
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问
请问我的目的基因的本身GC含量就比较高,该怎么样设计克隆引物?
秋秋欣欣
克隆引物就正常设计就可以,退火温度可稍微设置高一点
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问
荧光定量的标准曲线是否是必需的?
天一湖医者
荧光定量的标准曲线是非常必需的。
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问
PCR条带弥散严重,怎么解决呢?
天一湖医者
1.酶量过高。减少酶量;酶的质量差,调换另一来源的酶。2.dNTP浓度过高。减少dNTP的浓度。3.MgCl2浓度过高。可适当降低其用量。4.模板量过多。质粒DNA的用量应<50ng,而基因组DNA则应<200ng。
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问
1.引物二聚体严重是怎么回事?2.CT值偏大(CT值的大于等于30)是什么原因呢?3.体系双扩增的原因?
天一湖医者
引物设计不合理,两条或一条引物的3`端有互补序列,造成自己配对延伸而扩增。建议重新设计引物,,或者降低退火温度、增加模板和引物的量试下。
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问
wb 分离胶里面没凝好
bamboopiggy
实在不放心,就延长一下等待时间,一般混匀了,不会出问题的
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问
p12细胞培养
秋秋欣欣
培养细胞所需要的基本材料,培养瓶或皿,培养基,胰酶,以及基本耗材。
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问
肝星状细胞提取
天一湖医者
1. 大鼠腹腔麻醉后在超净台上剖腹,进行门静脉插管。2. 以D-Hanks‘液灌注,同时剪开下腔静脉,冲掉血液后,改灌以100 ml 酶消化液I(0.05% IV 型胶原酶)。 3. 待肝脏变软后,离体肝脏并剪碎,继续以酶消化液II(含20U/ml DNase I 的0.05% IV 型胶原酶)消化15 min,尼龙网过滤后以450 g 离心5 min(4℃,下同)。4. 以HBSS 重悬沉淀至
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问
做最小抑菌浓度,溶液和药物混匀后要震荡培养吗?
bamboopiggy
要震荡培养,但是如果你实在没有条件,也可以直接放37度
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问
淋巴瘤sudhl-8培养瓶里出现沉淀是污染了吗
bamboopiggy
感觉是污染了,你看看吹散以后,或者是稀释一下细胞以后,还是很快会这样么?
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问
请问各位怎么申请cytoscape里cluego软件的权限呢
bamboopiggy
查一下你邮箱的垃圾邮件里面有没有,有的会被误入到垃圾邮件
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问
细胞铺板 有一排不贴壁 其他的都贴
balalaLy
可能操作的过程中 没注意把那个孔污染了
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问
请教各位大佬,蛋白上样量50ug一直显示信号太弱,一点条带都没有,增加曝光时间,也还是没有,但是我舍友给我带了俩样,内参都显出来
秋秋欣欣
那可能是你的抗体稀释比太高了,降低一下比例试一下
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问
想用转铁蛋白做动物实验,请问一下人源的或者牛的转铁蛋白能用于小鼠的实验吗?
汤姆卜丽波
可以的,有很多实验都是这样操作的
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问
能不能分享一些动物肠道吻合的经验和技巧?
汤姆卜丽波
1、要保证吻合口处无张力,吻合肠段的肠袢应游离足够长度。2、要保证吻合口有良好的血液供给,应可清晰看到血管分支供应吻合口;肠管在无肠钳夹闭的情况下,肠管断端切缘应有活动性出血;肠管断端处的肠系膜不可分离过多,一般距断端1.0cm以内,否则易影响吻合口的血液供应。3、吻合口处的缝合过稀或打结过松可导致吻合口不愈或吻合口漏。4、肠壁边缘内翻不宜过多,以防止造成吻合口狭窄。5、术中应注意无菌操作, 做好
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问
如何查找基因的野生型基因?
秋秋欣欣
可以在NCBI上面查找,WT即为野生型基因
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问
天然产物生物合成的问题
汤姆卜丽波
同位素示踪法标记,结合生物信息学、分子生物学、分子遗传学以及生物化学等方法来研究天然产物生物合成的精细过程,除了将天然产物结构与相应生物合成基因相对应,还包括阐明生物合成的调控机制。还可以应用基因组测序。
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问
下面图分别是什么意思?感谢
汤姆卜丽波
左右两边是一个意思两种图示,都是突变的定量,串珠的位置及大小表示突变率,右图看不同颜色区域的面积
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