实验问答

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科研学霸天团，48小时有问必答

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问公司定的pcr引物如何验证是否合适？

丁香清香

可以用于正式实验的引物必须满足以下条件：a溶解曲线单峰，窄而尖，否则可能有非特异性扩增；峰的位置横坐标一般在80度以上，这个温度为PCR产物的解链温度，如果在75度附近，可能是引物二聚体，miRNA染料法检测时，溶解曲线的峰的位置可能在75度附件b琼脂糖电泳为明亮的一条带，条带一般在100bp以上，如果设计引物时PCR产物在100bp一下，需要仔细辨认是否为引物二聚体；引物二聚体的条带一般在50b

3 回答884 围观

问CRISPR全基因组慢病毒文库感染细胞后，检测每种gRNA感染细胞个数，提细胞基因组后，PCR时需要加多少量？

秋秋欣欣

只要细胞量足够，根据试剂盒操作手册来做就可以。

3 回答225 围观

问核酸浓度和所含碱基数有关系吗？

秋秋欣欣

核酸浓度和所含碱基数没有关系的

3 回答313 围观

问qpcr

丁香清香

熔解曲线可以检验扩增反应的特异性,因此是qPCR实验的必需步骤

4 回答571 围观

问小白问，如何把活细胞和碎片分离开来？

whilt-shirt

可以用percoll分离，活细胞和细胞碎片密度不一样，离心后的层数也不一样

3 回答1670 围观

问求助标准菌株的优势与来源

汤姆卜丽波

标准菌株目标产物的量及纯度都比分离株好一些，更有说服力

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问小鼠th17/treg流式需要诱导阻断吗！

汤姆卜丽波

Monensin等阻断剂是Na+的离子载体。细胞经其处理之后，Na+、H+梯度被破坏，并且高尔基体的转运和分泌被阻断，新合成的蛋白从而滞留和浓缩在细胞内。分泌型蛋白（如细胞因子IFN-γ/IL-4/IL-17a等），在做流式检测时都应提前用Monensin或者同类的BFA（布雷福德菌素）处理4个小时以上方可检测。

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问WB一抗和内参的区别

balalaLy

要先理解什么叫内参。GAPDH跟你的目的基因一样，都是细胞中表达的某种蛋白，只不过GAPDH在诸多细胞中都有表达且表达量不容易受其它因素的影响，所以被用来作为参照，就是内参的意思

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问蛋白质和三氯乙酸/苦味酸的反应原理？

bamboopiggy

蛋白质和三氯乙酸的反应是不可逆的。生物碱是植物中具有显著生理作用的—类含氮的碱性物质。凡能使生物碱沉淀，或能与生物碱作用产生颜色反应的物质，称为生物碱试剂。如鞣酸、苦味酸和磷钨酸等。当蛋白质溶液pH值低于其等电点时，蛋白质为阳离子，能与生物碱试剂的阴离子结合成性盐而沉淀。溶液中的蛋白亦能被有机酸沉淀，其中以三氯醋酸的作用最为灵敏而且特异

3 回答2262 围观

问co-ip的两个问题

汤姆卜丽波

位置不同可能是收到了重链的干扰。避免干扰可以使用IPkine二抗，增加Input和IP泳道上样量，减少曝光时间，以及阴性对照IgG使用量建议调整到1ug以下。

4 回答1270 围观

问lncRNA 过表达后pull down

秋秋欣欣

可以先测一下lncRNA表达量，如果表达量比较低为了更好的实验效果可以先过表达再pull down

3 回答436 围观

问请问微卫星灶的杂合性缺失属于微卫星不稳定吗？

汤姆卜丽波

MSI是肿瘤常见的分子遗传改变，可作为肿瘤的克隆标志应用于肿瘤的早期诊断。肿瘤常在抑癌基因位点出现LOH，应用微卫星标志容易检测，通过检测分析肿瘤染色体LOH及其规律，可在染色体一定范围内发现肿瘤的抑癌基因及易感基因，可以说一般二者伴随出现

2 回答327 围观

问肺微血管内皮细胞分离

秋秋欣欣

⼀般情况下，应⽤2 g/L的Ⅰ型或Ⅱ型胶原酶消化20 min～30 min。在某些情况下，需要再采⽤1 g/L 胰蛋⽩酶/0.1%EDTA溶液进⾏⼆次消化，但总消化的时间应控制在30 min以内，以减少微⾎管内⽪细胞的损伤。消化后的组织悬液需要⽤⾎清终⽌酶活性，并将组织悬液通过200⽬的⾦属筛去除未消化组织。

3 回答1663 围观

问是隐窝结构嘛？

秋秋欣欣

你这个看着有点像隐窝结构。但可以在高倍镜下看看是否有绒毛。

4 回答561 围观

问求助/SD大鼠肌肉肌梭电镜图急急急

秋秋欣欣

可以文献以及网上数据库查看看。

2 回答526 围观

问载体和DNA连接体系，怎么计算加样体积？

bamboopiggy

这个一般算的是摩尔比，你直接拿你测的浓度，除以碱基数，然后二者相比，有4-10：1就可以

3 回答2052 围观

问10%的甲醛溶液可以固定组织吗

yanlai000

可以，10%的甲醛又叫福尔马林，福尔马林一般用于正常组织染色，而4%多聚甲醛多用于需进行免疫组化或免疫荧光等需要进行抗体标记的组织，因此需要根据需要进行组织固定。

5 回答3482 围观

问TCGA数据库筛选MSI-H肿瘤样本

秋秋欣欣

在TCGA的GDC里面就可以直接搜索

3 回答840 围观

问求助：在利用响应面分析时是否考虑细胞增殖的问题？

秋秋欣欣

在利用响应面分析时应该要考虑细胞增殖的问题，会对结果有影响。

3 回答330 围观

问流式细胞图怎么看

yanlai000

先看物理参数的图，即FSC和SSC的图。FSC，即前向角散射，它的值代表细胞的大小，可以利用FSC值对细胞进行分群和分类。SSC，即侧向角散射，它的值代表细胞的颗粒度（granularity），可以利用细胞的SSC值初步比较细胞的颗粒度，利用SSC值对细胞进行分群和分类。然后看荧光通道的图，以CD3为横轴，CD8为纵轴为例子，画十字门后分为四个限象Q1-Q2-Q3-Q4，其分别代表Q1(CD4-C

2 回答1402 围观

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