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问
谷氨酸棒杆菌电转,每个电击杯加多少质粒和菌液呢?
府宅
转化时一般200ul感受态细胞悬液 中加入的质粒含量不超过50ng,体积不超过10ul。将40~100ul解冻的感受态细胞转移电击杯
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问
外泌体研究
dxy_gwrp7ndq
可使用洗涤剂处理和超声波替代电穿孔方式
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问
关于Naive CD4+T的活化增殖
天一湖医者
CD3不超过50ng/ml,CD28不超过30ng/ml。
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问
Pcrtargeting切除抗生素是电转进Bt340后在37度完成筛选吗?然后在42度过夜诱导吗
府宅
37度培养筛选,42度热击90秒
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问
胶体金释放不完全问题
天一湖医者
可能是因为你的胶体金的颗粒大小的选择和最佳抗体标记量的选择上出了问题,这是多方面的因素导致的,你得先固定一个影响因子来调另一个因子,这样反复实验看看效果。
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问
求助hepG2炎症模型建立
汤姆卜丽波
做过诱导巨噬细胞的,有很多文章都涉及到LPS刺激或者影响hepG2炎症因子分泌的,你可以看看参考一下
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问
广集讨论
秋秋欣欣
QRICH1是UPR中PERK-eIF2a通路的关键效应因子,是细胞进入内质网应激终末端的主要决定因素。
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问
求助,wb糊成一片
府宅
样品量太大了,不论是胶还是膜,承受能力都有限度,这样跑胶蛋白会连成一条线,转膜时候,单位面积的膜能hold的蛋白量是一定的,相同分子量的蛋白太多,目的蛋白的转膜效率可能很受干扰,倒是建议你0.2的PVDF,降低蛋白上样量,提高一抗浓度
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问
如何提高circRNA的成环效率
天一湖医者
由于circRNA本身就能环化,所以将circRNA两侧的内含子序列充当环化臂进行构建;另外,也可以取一侧内含子序列1kb,另一 侧构建互补序列充当环化臂,最后检测circRNA的过表达效率,取最佳构建方式。
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问
实时定量PCR进行比较时,需要进行统计吗?如何进行统计学分析?
秋秋欣欣
需要进行统计分析的,计算样本的平均±SD,CV
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问
ELISA实验结果出现不在线性范围,高可以稀释样品,低的要怎么弄呢?对比OD值,结果能认吗?
汤姆卜丽波
可以搞个再灵敏一点的试剂盒测试一下
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问
input可以做出来,IP一直拉不下来是什么原因
汤姆卜丽波
是不是抗体用的不对,或者两个蛋白之间互作不大
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问
请问在做植物细胞悬浮培养时(百合),如果要将愈伤组织分散,所用的酶有哪些,对应的用量是多少呀?浓度和用量之类的。
迟C迟
用果胶酶和纤维素酶。称取25mg蛋白酶粉配制成25ml酶溶液,每次用100-200微升就可以。
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问
做完转录组学后,必须要做q-pcT昨做验证吗
迟C迟
看文献吧,一般需要再次用qPCR验证一下公司做的转录组数据准不准确的。
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问
纳米材料加入真菌培养基后易被析出。
天一湖医者
纳米抗菌材料与真菌接触后会诱导其细胞产生氧化应激反应,从而使真菌的细胞结构和脂质、蛋白质和DNA等成分被氧化破坏。有些情况下纳米抗菌材料也会使真菌细胞内部产生超氧阴离子自由基、羟基自由基、过氧化氢和单线态分子氧等活性氧物种,这些物质的过度累积会造成细胞的凋亡。
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问
用大肠杆菌纯化蛋白时出现包涵体怎么办?
迟C迟
可以用尿素(8M-10M):尿素溶解不电离,呈中性,成本低,蛋白复性后除去不会造成大量蛋白沉淀;溶解后的包涵体可选用多种色谱方法纯化。 或者用盐酸胍(6M-8M):溶解能力强,高达95%以上的溶解作用。
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503 围观
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问
培养真菌所用PDA培养基调整ph值后很难凝固,求助
天一湖医者
降低pH值造成培养基酸解,因此不易凝固
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问
WB实验内参不齐,怎么校准?
宁儿小贤
提完蛋白之后做一下BCA蛋白定量,将总蛋白调整到同一量级,例如都是七八百,或者都是一点几,一般上样之后就没问题了
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问
自带发光基团的抗体都会串光吗?实验室买的PH3就会串光,只能避开串光的波长来做实验
balalaLy
串光的话可以根据共染的几个荧光光谱适当缩小一下
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问
冷冻切片一般厚度是多少,多大厚度不影响染荧光抗体呢
balalaLy
看你的是什么组织。切片的厚度一般都是越薄越好,像脑组织可以切到6um左右就挺不错了。但是有些组织太薄了一方面不容易切,另一方面可能观察不到某些结果
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