bamboopiggy
用凋亡的marker,去染小鼠结肠组织。
府宅
可采用TUNEL方法检测凋亡率
天一湖医者
TUNEL检测方法
1、组织TUNEL实验中关键步骤
1)充分脱蜡和水化 <TIPS>
脱蜡前切片可以先在65℃烤箱中烘烤30min,再使用二甲苯进行脱蜡10-20min,而水化则用梯度乙醇从高浓度到低浓度浸洗5min。
2)把握好细胞通透的时间 <TIPS>
根据切片的厚薄选择蛋白酶k的孵育时间,蛋白酶K使用浓度不得低于
20 μg/mL,常用37℃处理10-30 min,6um切片时间稍短,20um切片增长时间,通过摸索达到既不脱片又能够使后面的酶和抗体进入胞内。处理时间过长易脱片、过短达不到通透效果。
3)适当延长TUNEL反应液时间 <TIPS>
建议处理条件是37℃反应2 h,可以根据预估的凋亡损伤程度选择更长的时间,建议结合zui终的背景着色进行判断。
4)PBS的充分清洗 <TIPS>
在TUNEL反应后的清洗应十分严格,建议使用PBST重复清洗后再换PBS彻底清洗,或者增加PBS洗涤次数,因为这些清洗直接决定zui后切片的非特异性着色。
小鼠肠道组织石蜡切片,200倍放大,红色荧光为发生晚期凋亡的细胞。
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可采用流式细胞仪检测肠细胞凋亡率
秋秋欣欣
处理了之后送流式,检测细胞凋亡率
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