请问怎样检测小鼠结肠组织的凋亡率呀

用凋亡的marker，去染小鼠结肠组织。

可采用TUNEL方法检测凋亡率

TUNEL检测方法

1、组织TUNEL实验中关键步骤

1）充分脱蜡和水化 <TIPS>

脱蜡前切片可以先在65℃烤箱中烘烤30min，再使用二甲苯进行脱蜡10-20min，而水化则用梯度乙醇从高浓度到低浓度浸洗5min。

2）把握好细胞通透的时间 <TIPS>

根据切片的厚薄选择蛋白酶k的孵育时间，蛋白酶K使用浓度不得低于

20 μg/mL，常用37℃处理10-30 min，6um切片时间稍短，20um切片增长时间，通过摸索达到既不脱片又能够使后面的酶和抗体进入胞内。处理时间过长易脱片、过短达不到通透效果。

3）适当延长TUNEL反应液时间 <TIPS>

建议处理条件是37℃反应2 h，可以根据预估的凋亡损伤程度选择更长的时间，建议结合zui终的背景着色进行判断。

4）PBS的充分清洗 <TIPS>

在TUNEL反应后的清洗应十分严格，建议使用PBST重复清洗后再换PBS彻底清洗，或者增加PBS洗涤次数，因为这些清洗直接决定zui后切片的非特异性着色。

小鼠肠道组织石蜡切片，200倍放大，红色荧光为发生晚期凋亡的细胞。

可采用流式细胞仪检测肠细胞凋亡率

处理了之后送流式，检测细胞凋亡率